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형질전환은 유전자의 기능을 이해하는데 매우 중요한 기법이다. Ca<SUP>2+</SUP>-인산 침전법은 시간과 비용이 저렴하여 가장 흔히 사용된다. 그러나 성숙 신경세포는 어린 신경세포나 다른 세포종에 비하여 형질전환이 어렵고 쉽게 죽는다. 본 연구에서는 Clontech사의 CalPhos™ Mammalian Transfection 방법을 수정하여 성숙한 신경세포를 효율적으로 형질전환할 수 있는 방법을 고안하였다. 대뇌 신경교세포를 DMEM/10% 말혈청에서 70-80% confluence까지 키우고 배지를 혈청이 첨가되지 않은 Neurobasal/Ara-C로 바꾸어 주어 더 이상 신경교세포가 분열하지 않게 한 다음, 여기에 E19 해마신경세포를 접종하여 배양하였다. DNA/Ca<SUP>2+</SUP>-인산 침전물은 Clontech사의 CalPhos™ Mammalian Transfection Kit을 이용하여 크기(0.5-1 ㎛ in diameter) 및 농도(약 10 particles/100 ㎛²)를 배지에서 배양시간을 변화시켜 적당히 조절하였다. 이렇게 하면 in vitro에서 2주 이상 배양한 신경세포도 24-well plate 한 well 당 10-15개의 형질전환된 건강한 신경세포를 얻을 수 있었다. 이 방법의 효용성을 검증하기 위하여 연접단백질인 EGFP-CaMKIIα 융합단백질과 RFP 단백질 유전자(각각 pEGFP-CaMKIIα 및 pDsRed2)를 형질전환한 결과 전자는 점박이 모양, 후자는 세포전체에 퍼진 양상의 표현을 관찰할 수 있었다. 따라서 본 연구는 성숙한 신경세포를 효율적으로 형질전환할 수 있는 방법을 제공한다.
목차
Introduction
Materials and Methods
Results and Discussion
Acknowledgement
References
초록
참고문헌 (19)
참고문헌 신청
Barkats, M., A. Bilang-Bleuel, M. H. Buc-Caron, M. N. Castel-Barthe, O. Corti, F. Finiels, P. Horellou, F. Revah, O. Sabate and J. Mallet. 1998. Adenovirus in the brain: recent advances of gene therapy for neurodegenerative diseases. Prog. Neurobiol. 55,
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