에폭사이드 가수분해효소 유전자의 double expression cassette 재조합 Pichia pastoris를 이용한 enantiopure styrene oxide의 제조

김희숙

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자료유형: 학술저널

저자정보: 김희숙

저널정보: 한국생명과학회 생명과학회지 생명과학회지 제18권 제1호

발행연도: 2008.1

수록면: 136 - 142 (7page)

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Rhodotorula glutinis epoxide hydrolase (EH) 유전자를 pPICZ vector에 이중발현 cassette로 재조합하여 발현시킨 재조합균주 Pichia pastoris를 제작하였으며 라세믹 styrene oxide 혼합물로부터 고순도 광학활성 (S)-styrene oxide를 제조하는데 사용하였다. 본 연구에서 사용된 R. glutinis EH 유전자는 전보에서 사용한 pPICZ B/RgEH plasmid DNA를 주형으로 하여 얻었으며 PCR 방법으로 BglII 제한자리를 돌연변이 시키고 AOX1 promoter (PAOX1)-RgEH 유전자-전사종결서열(TTAOX1)을 이중으로 가진 이중발현 cassette를 만들어 P. pastoris의 염색체 DNA에 삽입시켰다. 반응온도를 30℃로 하였을 때, RgEH를 이중발현 cassette로 발현시킨 재조합균주 P. pastoris의 (R)-styrene oxide에 대한 Vmax 값은 2.2 μmol min?¹ (mg dcw)?¹ 으로 단일발현 cassette로 발현시킨 P. pastoris의 0.4 μmol min?¹ (mg dcw)?¹에 비하여 6배 향상되었다. 광학순도가 높은 (S)-styrene oxide를 제조하는 최적조건을 찾기 위하여 입체선택적 가수분해 속도 및 수율에 미치는 detergent 및 온도의 효과를 실험하였으며, Tween 20을 0.5% 첨가하고 10℃로 반응시킨 경우 10분 반응을 통해 99.9% ee 이상의 고순도 (S)-styrene oxide를 43.4% 얻을 수 있었다.

#Epoxide hydrolase #enantiopure #styrene oxide #double expression cassette

참고문헌 (19)

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1. [학술지(정기간행물)] - Archelas, A / 2001 / Synthetic applications of epoxide hydrolases / Curr. Opin. Chem. Biol 5 : 112 ~ 119

2. [학술지(정기간행물)] - Belousova, N / 2006 / Circumventing recombination events encountered with production of a clinical-grade adenoviral vector with a double-expression cassette / Mol. Pharmacol 70 : 1488 ~ 1493

3. [학술지(정기간행물)] - Besse, P / 1994 / Chemical and biological synthesis of chiral epoxides / Tetrahedron 50 : 8885 ~ 8927

4. [학술지(정기간행물)] - Choi, W. J. / 1998 / Kinetic resolution for optically active epoxides by microbial enantioselective hydrolysis / Biotechnol. Tech 12 : 225 ~ 228

5. [단행본] - Collins, A. N. / 1992 / Chirality in industry / John Wiley & Sons : 1 ~ 66

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Hee Sook Kim

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