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대장균의 필수적인 리보핵산 내부분해효소인 RNase E는 세포 내에서 여러 RNA의 분해와 가공과정에서 중요한 역할을 하며, 이 단백질의 효소활성부위를 포함하는 N-말단부위의 498 아미노산(N-Rne)만의 발현으로도 세포의 생장을 가능하게 한다. 이러한 RNase E의 특성을 활용하여 다양한 표현형을 가지는 N-Rne 돌연변이체들을 분리, 동정할 수 있는 효율적인 유전학적 시스템을 개발하였다. 이 시스템을 이용하여 얻어진 효소활성부위 돌연변이체들을 표현형으로 분류하여 분석한 결과, S1 도메인의 6번째 아미노산의 치환(I6T)을 가진 변이체는 야생형 N-Rne의 기능을 대체하지 못하였고, Small 도메인의 488번째 아미노산의 치환(R488C)을 가진 변이체는 야생형 N-Rne의 발현양보다 현저히 작게 발현시켜도 세포의 생장을 정상적으로 가능하게 하였다. 또한 DNase Ⅰ 도메인의 305번째 아미노산의 치환(N305D)을 가진 변이체는 야생형 N-Rne의 발현양보다 과발현시켰을 때만 세포의 생장을 가능하게 하였다. 각각의 아미노산 치환을 포함하는 N-Rne를 한정적으로 과발현시켰을 때의 ColE1-타입 플라스미드의 복제 수에 대한 영향을 측정한 결과, 돌연변이체 N-Rne의 세포생장에 대한 영향은 이 변이체들의 세포 내 효소활성 정도에 기인하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 실험결과는 이 연구에서 개발한 유전학적 시스템을 이용하여 다양한 표현형을 가진 RNase E 변이체를 선별할 수 있으며, 이 변이체들의 특성을 분석함으로써 RNase E가 RNA의 안정성을 조절하는데 있어서 각각의 세부 도메인의 역할을 규명할 수 있으리라는 것을 시사한다.
목차
재료 및 방법
결과 및 고찰
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ABSTRACT
참고문헌 (33)
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1. [학술지(정기간행물)] - / / D. and A.B. Lassar. 1978. A conditional lethal mutant ofEscherichia coli which affects the processing of ribosomal RNA.J. Biol. Chem. 253 : 1738 ~ 1742
2. [학술지(정기간행물)] - Callaghan A J / 2005 / Structure of Escherichia coli RNase Ecatalytic domain and implications for RNA turnover 437 : 1187 ~ 1191
3. [학술지(정기간행물)] - A.J / / and H.M. Krisch.1994. Co-purification of E. coli RNase E and PNPase Evidencefor a specific association between two enzymes important in RNAprocessing and degradation. Cell 76 : 889 ~ 900
4. [학술지(정기간행물)] - Codon C / 2002 / Ribonuclease M5 has few if any mRNA substrates in Bacillus subtilis 184 : 2845 ~ 2849
5. [학술지(정기간행물)] - Feng Y / 2001 / Escherichia coli poly A binding proteins that interact with components of degradosomes or impede RNA decay mediated by polynucleotide phosphorylase and RNase E 276 : 31651 ~ 31656
2. [학술지(정기간행물)] - Callaghan A J / 2005 / Structure of Escherichia coli RNase Ecatalytic domain and implications for RNA turnover 437 : 1187 ~ 1191
3. [학술지(정기간행물)] - A.J / / and H.M. Krisch.1994. Co-purification of E. coli RNase E and PNPase Evidencefor a specific association between two enzymes important in RNAprocessing and degradation. Cell 76 : 889 ~ 900
4. [학술지(정기간행물)] - Codon C / 2002 / Ribonuclease M5 has few if any mRNA substrates in Bacillus subtilis 184 : 2845 ~ 2849
5. [학술지(정기간행물)] - Feng Y / 2001 / Escherichia coli poly A binding proteins that interact with components of degradosomes or impede RNA decay mediated by polynucleotide phosphorylase and RNase E 276 : 31651 ~ 31656
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