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학술저널
저자정보
이경미 (경상대학교 축산진흥연구소) 곽대오 (경상대학교 과학교육과) 송상현 (경상대학교 축산진흥연구소) 최양석 (경상대학교 축산진흥연구소) 김윤연 (경상대학교 생물학과) 강다원 (경상대학교 축산진흥연구소) 하란조 (경상대학교 축산진흥연구소) 윤창현 (경상대학교 축산진흥연구소) 박충생 (경상대학교 축산진흥연구소)
저널정보
한국동물번식학회 한국수정란이식학회지 한국수정란이식학회지 제11권 제3호
발행연도
1996.1
수록면
249 - 258 (10page)

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To improve the efficiency of in vitro production of embryos with follicular oocytes in Korean Native cows, the recovery rates, in vitro maturation, fertilization and development, and the time required for collecting and processing oocytes by aspiration with or without slicing were evaluated comparatively. The ovaries were obtained from a local abattoir and placed in physiological saline at 25~28$^{\circ}C$ and brought to the laboratory within 3 hrs. The oocytes were collected by aspiration of follicles(2~6mm) with or without slicing ovaries after aspiration, and classified into Grade I, Grade II, Denuded, Expanded oocytes by the morphology of cumulus cells attached and the homogeneity of cytoplasmic granules. Also the time required for each step of collecting and processing oocytes were measured. The cumulus cells were removed in some Grade I oocytes to measure their size and nuclear configuration before and after in vitro maturation. The Grade I oocytes were matured in vitro(IVM) for 24 hrs. in TGM-199 supplemented with 35$\mu$g /ml FSH, 10$\mu$g /ml LH, 1 $\mu$g /ml at 39$^{\circ}C$ under 5% C02 in air. They were fertilized in vitro(IVF) by epididymal spermatozoa treated with heparin for 24hrs. and then the zygotes were cocultured in vitro (IVC) with bovine oviductal epithelial cells for 10 days. The results obtained were as follows: The number of oocytes recovered per ovary was averaged 6.6 by aspiration and 11.2 by slicing post aspiration, which summed to 17.8. The number of Grade I oocytes recovered per ovary was averaged 3.1 by aspiration and 3.6 by slicing, which summed to 6.7. The percentage of Grade I to total oocytes recovered was significantly(P<0.05) higher as 48.0 % in aspiration than 31.6% in slicing post aspiration. The time requlred for recovering a Grade I oocyte by aspiration and slicing was 1.1 and 2.5 min, respectively. The mean diameter of Grade I oocytes by aspiration and slicing was similar as 148.7 and 151.5$\mu$m, respectively. The percentage of Metaphase II stage oocytes after IVM for 24 hours was significantly (P<o.05) lower in slicing(64.0%) than in aspiration(81.5%). Of the cleaved embryos, the percentage of embryos developed to blastocyst stage after culture for 10 days post insemination was similar as 23.3% and 20.5% in aspiration and slicing, respectively. These results suggest that the oocyte collection by slicing post aspiration could result in two fold increase in the yield of Grade I follicular oocytes and blastocysts from the bovine ovaries obtained at abattoirs, although the time required for collecting a Grade I oocyte was more than twice in slicing, compared with aspiration of oocytes from the visible follicles.
#IVF #oocyterecovery #bovine embryo

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