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저자정보
Shin Hae Ja (동서대학교) Hyeon Seok Hywan (동서대학교) 차재호 (부산대학교) 임운기 (부산대학교)
저널정보
한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 한국미생물·생명공학회지 제49권 제4호
발행연도
2021.12
수록면
510 - 518 (9page)
DOI
10.48022/mbl.2109.09013

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Bacteriophages are considered excellent sensing elements for platforms detecting bacteria. However, their lytic cycle has restricted their efficacy. Here, we used the minor coat protein pIII domain (N1N2) of phage CTXφ to construct a novel surface plasmon resonance (SPR) biosensor that could detect Vibrio cholerae. N1N2 harboring the domains required for phage adsorption and entry was obtained from Escherichia coli using recombinant protein expression and purification. SDS-PAGE revealed an approximate size of 30 kDa for N1N2. Dot blot and transmission electron microscopy analyses revealed that the protein bound to the host V. cholerae but not to non-host E. coli K-12 cells. Next, we used amine-coupling to develop a novel recombinant N1N2 (rN1N2)?functionalized SPR biosensor by immobilizing rN1N2 proteins on gold substrates and using SPR to monitor the binding kinetics of the proteins with target bacteria. We observed rapid detection of V. cholerae in the range of approximately 103 to 109 CFU/ml but not of E. coli at any tested concentration, thereby confirming that the biosensor exhibited differential recognition and binding. The results indicate that the novel biosensor can rapidly monitor a target pathogenic microorganism in the environment and is very useful for monitoring food safety and facilitating early disease prevention.

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