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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 발행연도
- 2013
- 저작권
- 원광대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
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Aspergillus nidulans 에서 nsdD는 GATA type transcription factor를 암호화 하고 있으며, 유성분화에 positive regulator 로 작용한다. NsdD 단백질 의 N-terminal 에 sGFP 를 tagging 하여 NsdD 의 발현을 관찰하였다. 형광 현미경으로 관찰한 결과 NsdD 단백질은 vegetative 초기에는 핵에 존재하지 않고 vegetative 12 시간부터 핵에 위치하게 된다. N-terminal 부분을 제거 하거나 NLS 부위를 point mutation 을 하여 NsdD 단백질을 관찰하면 핵에 위치하지 않고 세포질에 존재하는 것을 관찰하였다. NsdD 단백질이 핵으로 들어가는데 있어 NsdD 단백질의 N-terminal 과 NLS 부위가 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다. 또한 유성분화 억제 조건 중 1M KCl, 2% Acetate, 1.2M Sorbitol, Light 조건에 영향을 받아 NsdD 단백질이 핵으로 들어가지 않는 것을 관찰하였다. NsdD 단백질은 VeA 단백질에 의해 vegetative 초기부터 핵으로 들어가는 것이 억제 되고 IndB 단백질에 의해서는 vegetative 12 시간부터 핵에 들어가는 것이 억제되며 IndD 단백질에 의해서는 vegetative 초기부터 핵에 들어가는 것이 억제 되는 것으로 사료된다.
목차
Ⅰ. 서 론 1Ⅱ. 실험 재료 및 방법 41. 균주 및 플라스미드 42. 배지와 배양 조건 41) 최소배지 (MM)의 조성 52) 완전배지 (CM)의 조성 53) LB 배지의 조성 63. 제한효소 및 시약 64. Plasmid DNA 와 Genomic DNA 추출 75. Total RNA 추출 76. 중합효소 연쇄반응 (PCR)과 Primers 81) PCR 혼합액 (Composition of PCR reacion mixture) 87. E.coli 와 A.nidulans 형질전환 81) CaCl2 를 이용한 E.coli 의 형질전환 82) A. nidulans 의 형질전환 108. Northern Blot 분석 119. sGFP 형광을 이용한 NsdD 단백질 발현양상의 분석 12Ⅲ. 결 과 171. NsdD 의 N-terminal 에 GFP tagging plasmid 제조 및 분석 171.1. pNGND-a vector 제조 171.2. pNGND-969- vector 제조 171.3. pNGND-K389L vector 제조 182. NsdD 의 N-terminal 에 GFP tagging 된 균주 분리 및 분석 232.1. NGND (alcA(p)::GFP::nsdD::Qa) 형질전환체 분리 및 분석 232.2. NGND-969- (alcA(p)::GFP::nsdD-969-::Qa) 형질전환체 분리 및 분석 272.3. NGND-K389L (alcA(p)::GFP::nsdD-K389L::Qa)형질전환체 분리 및 분석 303. 유성분화 억제 조건에서 NGND의 분석 334. NGND1 (alcA(p)::GFP::nsdD; veA1) 재조합체 분리 및 분석 365. NGND 균주와 indB/D 과다발현균주의 교배 및 재조합체 분석 405.1. NGND와 indB/D 과다발현균주의 교배 405.2. NGND × indB/D 과다발현균주의 재조합체 분석 41Ⅳ. 고 찰 50Ⅴ. 적 요 52Ⅵ. 참 고 문 헌 53
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