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논문 기본 정보

자료유형
학위논문
저자정보

박지영 (대구한의대학교, 대구한의대학교 대학원)

지도교수
김미려
발행연도
2014
저작권
대구한의대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수11

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이 논문의 연구 히스토리 (3)

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본 연구에서는 천연 한약재로부터 비만 및 당뇨병에 효과적인 소재를 개발하기 위한 연구의 일환으로 죽엽, 금은화, 갈근, 산사를 포함하는 새로운 복합한약재(PLPC)가 3T3-L1 지방세포와 L6근육세포에서 당 및 지방대사에 미치는 효과를 실험분석하였다. 먼저 In vitro에서 PLPC와 구성한약재의 총 플라보노이드 및 페놀 함량을 분석하였다. 또한 MTT분석을 통하여 PLPC 물추출물이 3T3-L1 및 L6세포의 세포생존율에 미치는 영향을 측정하였다. 그리고 PLPC 물추출물 처리후 Oil-Red O 염색법을 통해 지방세포의 분화 및 지방축적 정도를 측정하였다. 마지막으로 PPARγ, C/EBPα 및 GLUT4의 전사 발현 수준 및 AMPK, ACC, PPARγ, C/EBPα및 GLUT4의 단백질발현 수준을 역전사중합효소 연쇄반응과 웨스턴 블랏을 통하여 분석하였다. 그 결과, PLPC물추출물의 총 플라보노이드 및 페놀 함량은 각각 구성 한약재 추출물에 비해 유의적으로 다량 함유되어 있었다. PLPC물추출물은 알파 글루코시데이즈와 알파 아밀라아제 활성을 양성대조군인 아카보즈군 보다 각각 46.88% 및 145.35% 만큼 억제시켰다. 3T3-L1 및 L6 세포에서 PLPC 물추출물은 0.05 ? 0.8 mg/ml 범위에서 세포독성이 관찰되지 않았으며, PLPC 물추출물 처리 후 지방세포의 세포 내 중성지방 함량은 DMSO를 처리한 대조 지방세포에 비해 유의적으로 감소하였다. 또한 PLPC 물추출물을 처리한 세포는 대조세포에 비하여 지방생성유도 전사인자인 PPARγ 및 C/EBPα의 단백 발현수준을 억제하였으며, 지방과 근육세포에서 AMPK, ACC의 인산화 증가와, GLUT4의 세포질에서 세포막으로의 전위를 증가시켰다. 이상을 요약하면, PLPC 물추출물은 단일 추출물에 비해 높은 함량의 총 플라보노이드 및 페놀성분을 함유하고 있으며, PPARγ, C/EBPα 및 AMPK의 조절을 통해 지방세포분화와 지방축적 저해를 유도하는 것으로 생각된다. 또한 다당류 및 이당류 분해효소 활성저해 효과, 3T3-L1 지방세포 및 L6 근육 세포에서 GLUT4 세포내 이동을 촉진함으로써 포도당 항상성 조절에 영향을 미치는 것으로 생각된다. 따라서 PLPC 물추출물은 비만 및 당뇨병의 예방과 치료에 효과적인 천연소재로 활용될 수 있을 것이라 사료된다.

목차

Ⅰ. Introduction 1
Ⅱ. Materials and Methods 5
2.1. Preparation of extract of herbal mixture (PLPC) 5
2.2. Determination of total flavonoids and phenolics contents 6
2.3. Measurement of α-glucosidase and α-amylase activities 7
2.4. Cell culture and differentiation of 3T3-L1 and L6 cells 9
2.5. Cell viability assays in 3T3-L1 and L6 cells 10
2.6. Preparations of protein fraction in cell membrane from 3T3-L1 11
2.7. Oil-Red O staining in 3T3-L1 cells 12
2.8. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) 13
2.9. Western blot analysis 15
2.10. Statistical analysis 17
Ⅲ. Results 18
3.1. Concentration of total flavonoids and phenolics levels in extract 18
3.2. Effects of PLPC extract on α-glucosidase and α-amylase activities 20
3.3. Effects of PLPC extract on cell viabilies in 3T3-L1 and L6 cells 22
3.4. Effects of PLPC extract on cell differentiation and lipid accumulation 24
3.5. Effects of PLPC extract on mRNA expressions of target biomarker 27
3.6. Effects of PLPC extract on protein expressions of target biomarker 30
Ⅳ. Discussion 34
References 41
Abstract in Korean 49
Abstract 51

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