Non-viral Gene Delivery of PAMAM Dendrimer using Nuclear Localization Signal originated from Fibroblast Growth Factor 3 :섬유아세포 증식인자 3로부터 유래된 핵 수송 신호를 이용한 PAMAM dendrimer의 비바이러스 유전자 전달

이제일

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자료유형: 학위논문

저자정보: 이제일 (충남대학교, 충남대학교 분석과학기술대학원)

지도교수: 최준식 김윤중

발행연도: 2014

저작권: 충남대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수1

이 논문의 연구 히스토리 (7)

2021

Synthesis and Characterization of PAMAM Dendrimer Derivatives Conjugated with Nuclear Localization Signal Peptides as Gene Carriers

이제일 생화학과 2021.01 학위논문

2018

Gene Delivery of PAMAM Dendrimer Conjugated with KRTR Peptides Originated from Influenza B Virus Nucleoprotein

이제일 , 최준식 한국고분자학회 학술대회 연구논문 초록집 2018.10 학술대회자료

Nonviral Gene Delivery through PAMAM Dendrimer conjugated with Amphiphilic Dipeptides

이제일 , 최준식 한국고분자학회 학술대회 연구논문 초록집 2018.04 학술대회자료

2014

Non-viral Gene Delivery of PAMAM Dendrimer using Nuclear Localization Signal originated from Fibroblast Growth Factor 3

이제일 분석과학기술학과 응용과학 전공 2014.01 학위논문

2013

Gene Delivery using PAMAM Dendrimer modified by Nuclear Localization Signal peptides originated from Vp3 Protein of Simian Virus 40

이제일 , 정진우 , 최준식 한국고분자학회 학술대회 연구논문 초록집 2013.10 학술대회자료

PAMAM derivatives using Nuclear Localization Signal from simian virus 40T

이제일 , 정진우 , 최준식 한국고분자학회 학술대회 연구논문 초록집 2013.04 학술대회자료

PAMAM Derivatives using Nuclear Localization Signal originated from Adenovirus E1a for Gene Deilvery

이제일 , 정진우 , 박정범 외 1명 한국고분자학회 학술대회 연구논문 초록집 2013.04 학술대회자료

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Polyamidoamine (PAMAM) is one of the widely employed non-viral vectors in gene therapy research, and shows excellent biocompatibility and relatively low cytotoxicity. However, it has poor transfection efficiency compared with that of polyethylenimine (PEI, 25kD). To enhance the gene expression efficiency, I introduced the RRRK peptide from mouse fibroblast growth factor 3 (FGF3) to PAMAM, which is a known nuclear localization signal (NLS). I synthesized PAMAM?KRRR and PAMAM?RRRK to verify the difference of the induced functional status from reversal of the N-terminus. PAMAM containing the FGF3 peptide showed a transfection efficiency corresponding to that of PEI in HEK293, and HeLa cells, and showed much higher gene expression capacity than that of PEI in NIH3T3 cells with relatively decreased cytotoxicity. These results imply that introduction of the FGF 3 peptide has the potential to provide a novel PAMAM-based vector by enhancing its gene expression efficiency.

1. Introduction. 1
2. Materials and Methods 4
2.1 Materials 4
2.2 Synthesis of PAMAM-KRRR and PAMAM-RRRK 5
2.3 Agarose Gel Retardation Assay 6
2.4 Dynamic Light Scattering and ζ-Potential Measurements 6
2.5 Transmission Electron Microscopy 7
2.6 Heparin competition Assay 7
2.7 Cell Culture and Transfection Assay 8
2.8 Cytotoxicity Assay 9
2.9 Preparation of Alexa Fluor 532-labeled pCN-Luci and Confocal Microscopy 9
2.10 Statistical Analysis 10
3. Results 11
3.1 Synthesis Results of PAMAM-KRRR and PAMAM-RRRK 11
3.2 Analysis of Formation of Polyplexes by Agarose Gel Electrophoresis 13
3.3 Size and ζ-Potential Measurements of PAMAM-KRRR and PAMAM-RRRK/pCN-Luci Complexes 16
3.4 Transmission Electron Microscopy of PAMAM and PAMAMKRRR/plasmid DNA polyplexes 16
3.5 Evaluation of polyplex stability by polyanion competition assay 19
3.6 Transfection Efficiency of Different Cell Lines 19
3.7 Cytotoxicity Evaluation 22
3.8 Confocal Microscopy 24
4. Discussion 26
5. Conclusion 29
6. Reference 30
ABSTRACT 34

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