목적 : 본 연구는 STZ로 유발된 당뇨쥐의 고혈당으로 인한 신장 손상에 대한 태충혈과 삼음교혈 침 자극의 효과를 알아보고자 시행하였다. 방법 : 6주령의 수컷 ICR mice를 일주일간 적응시킨 뒤 STZ를 투여하지 않은 정상군, STZ 투여 후 침 치료를 시행하지 않은 대조군, STZ 투여 후 태충혈에 자침한 태충혈군, STZ를 투여한 후 삼음교혈에 자침한 삼음교혈군으로 나누었다. STZ는 150mg/kg을 50mM citrate buffer(pH 4.5)에 녹여 복강투여 하였으며, 침 치료군에게는 2주간 매일 1회 30초간 자침을 실시하였다. 식이 섭취량과 음수량은 매일 1회 각각 측정하였으며 2주간의 침 자극 최종일에는 12시간 동안 절식시키고 체중을 잰 뒤 개복하여 심장에서 혈액을 채취하여 혈중 glucose, blood urea nitrogen(BUN)를 측정하였고, 신장 조직에서의 glucose, reactive oxygen species(ROS), peroxynitrite(ONOO-), thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) 양을 측정하고 superoxide dismutases(SOD), glutathione peroxidase(GPx), nuclear factor-kappa B(NF-kB), cyclooxygenase-2(COX-2), inducible nitric oxide synthase(iNOS), interleukin-1 beta(IL-1β) 발현량을 비교하였다. 결과 : STZ로 유발된 당뇨쥐의 체중과 식이 섭취량, 음수량은 태충혈군과 삼음교혈군 모두 대조군에 비해 유의한 차이가 없었다. 혈중 BUN 수치는 태충혈군과 삼음교혈군 모두 대조군에 비해 유의하게 감소하였다 (p<0.001). 신장 조직 내 glucose 함량은 대조군에 비해 태충혈군이 유의하게 감소시켰고 (p<0.05), 신장 조직 내의 ROS는 태충혈군 (p<0.05)과 삼음교혈군 (p<0.01)모두 유의하게 감소시켰으며, TBARS는 태충혈군이 (p<0.05), ONOO-는 태충혈군과 삼음교혈군 모두 대조군에 비해 유의하게 감소시켰다 (p<0.001). 신장 조직의 SOD-1, catalase, GPx 발현량은 삼음교혈군이 대조군에 비해 유의하게 높게 측정되었으며 [(SOD-1(p<0.01), catalase(p<0.001), GPx(p<0.05)] 태충혈군에서 유의한 차이는 없었다. 신장 조직의 NF-kB p65는 태충혈군과 삼음교혈군 모두 대조군에 비해 유의한 변화가 없었다. 신장 조직의 COX-2 발현에 있어서는 태충혈군, 삼음교혈군 모두 대조군에 비해 유의한 감소를 나타내었고 (p<0.01), IL-1β의 발현에 있어서는 삼음교혈군이 유의한 감소를 나타내었으며 (p<0.01), iNOS 발현에 있어서는 두 군 모두 유의한 차이가 없었다. 결론 : 본 연구를 통해 STZ로 유발된 당뇨쥐의 신장 손상에 대하여 태충혈은 조직 내 혈당강하 작용, 지질과산화물의 감소에 있어서 유의한 효과를 보였고, 이에 반해 삼음교혈은 조직 항산화 효과와, 항염증 효과에 있어 유의한 효과를 보였다.
Objectives : This study was performed to investigate the effects of acupuncture on the renal damage in streptozotocin(STZ)-induced diabetic mice. Methods : ICR male mice were stabilized for a week and divided into 4 groups which is normal mice group(N), no-acupuncture diabetic mice group(Control), LR3 acupuncture diabetic mice group(LR3), SP6 acupuncture diabetic mice group(SP6). Diabetes was experimently induced by intraperitoneal injection of STZ(150 mg/kg) in citrate buffer(pH 4.5). For two weeks, LR3 and SP6 get acupunctured bilaterally at each point once a day. The stimulation continued for 30 second. Food and water intake were measured daily. After two weeks experimental periods, animals were taken weight and sacrificed after 12 hours fasting. Serum glucose, blood urea nitrogen(BUN) were measured from the blood taken from heart. We measured glucose, reactive oxygen species(ROS), peroxynitrite(ONOO-) and thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) in kidney and compared expression levels of superoxide dismutases(SOD), glutathione peroxidase(GPx), nuclear factor-kappa B(NF-kB), cyclooxygenase-2(COX-2), inducible nitric oxide synthase(iNOS), Interleukin-1 beta(IL-1β). Results : There was no significantly change in body weight, food and water intake between Control, LR3 and SP6. There was no significantly change in serum glucose compared to Control. BUN significantly decreased in both LR3 and SP6 compared to Control (p<0.001). Only LR3 significantly decreased glucose in the kidney compared to Control (p<0.05). Both LR3(p<0.05) and SP6(p<0.01) significantly decreased in ROS in the kidney and significantly decreased in ONOO- products in kidney compared to Control (p<0.001). Only LR3 significantly decreased in TBARS in kidney compared to Control (p<0.05). Only SP6 significantly increased in expressions of SOD-1(p<0.01), catalase(p<0.001), GPx(p<0.05) in the kidney compared to Control. There was no significant change in both LR3 and SP6 in expressions of NF-κB p65 compared to Control. Both LR3 and SP6 significantly decreased in COX-2 expressions compared to Control (p<0.01). Only SP6 significantly decreased in IL-1β compared to Control (p<0.01). There was no significant changes in iNOS compared to Control. Conclusions : This study suggests that LR3 acupuncture may be effective on control of glucose and lipid peroxidation and SP6 acupuncture may have antioxidative and antiinflamatory effects on the renal damage in STZ-induced diabetic mice.
Ⅰ. 서 론 1Ⅱ. 재료 및 방법 31. 재료 31) 동물 32) 침 33) 시약 32. 방법 41) 군 분류 42) 침 자극 43) STZ 유발 1형 당뇨쥐 모델 44) 체중, 식이 섭취량, 음수량 측정 55) 혈청 분석 56) 신장 조직의 glucose 함량 분석 57) 신장 조직의 ROS 함량 측정 58) 신장 조직의 ONOO- 함량 측정 69) 신장 조직의 지질과산화 함량 측정 610) 세포질 추출 611) 핵 추출 612) Western blot analysis 713) 통계처리 7Ⅲ. 결과 81. 체중, 식이 섭취량, 음수량에 미치는 영향 82. 혈당과 신장 기능에 미치는 영향 103. 신장 조직 내 glucose 함량의 변화 124. 신장에서 산화적 스트레스 억제 효과 145. 신장 조직에서 항산화 효소계에 미치는 영향 186. 신장 조직에서 산화 스트레스 관련 단백질 발현에 미치는 영향 227. 신장 조직에서 염증 관련 단백질의 발현에 미치는 영향 24Ⅳ. 고찰 28Ⅴ. 결 론 35참고문헌 37국문초록 42Abstract 44