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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 지도교수
- 서제훈
- 발행연도
- 2016
- 저작권
- 충북대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
이용수1
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Alpha B-crystallin (aBC)은 저분자열충격단백질로서 중추신경계통의 성숙 희소돌기아교세포(mature oligodendrocyte)에서 많이 발현되지만, 미성숙 희소돌기아교세포인 희소돌기아교전구세포(oligodendrocyte precursor cell)에서는 aBC가 발현되지 않는다. 이전 연구에서 산화스트레스를 주었을 때 성숙 희소돌기아교세포가 희소돌기아교전구세포보다 세포생존율이 높았으며, aBC가 산화스트레스로부터 세포 보호 역할을 할 가능성을 제시하였다. 본 연구에서는 희소돌기아교전구세포 내 aBC 발현을 증가시킨 후 과발현된 aBC가 산화스트레스 환경에서 희소돌기아교전구세포를 어떤 기전으로 보호하는지에 대해 조사하였다. 먼저 신생 흰쥐의 대뇌에서 분리한 희소돌기아교전구세포에 aBC 유전자를 삽입한 렌티바이러스를 감염시켜 세포 내 aBC를 과발현시켰다. 과산화수소(H2O2)로 산화스트레스 환경을 조성하여 aBC를 과발현시킨 희소돌기아교전구세포(aBC 과발현군)와 대조군(벡터군, 비감염군)의 세포생존율을 비교한 결과, 산화스트레스 환경에서 aBC 과발현군의 세포생존율은 대조군보다 통계적으로 유의하게 높았다. 세포 생존에 관여하는 Akt 활성은 산화스트레스가 없는 환경에서 aBC 과발현군과 대조군 사이에 유의한 차이를 보이지 않았다. 그러나 산화스트레스 환경에서 대조군의 Akt 활성은 통계적으로 유의하게 감소한 반면, aBC 과발현군의 Akt 활성은 대조군보다 높았고 산화스트레스가 없는 환경의 Akt 활성 수준을 유지하였다. 산화스트레스 환경에서 세포사유도단백질인 Bax와 caspase-3 발현은 대조군에서 증가하였으나 aBC 과발현군에서는 증가하지 않았고 산화스트레스가 없는 환경에서의 발현양과 유의한 차이가 없었다. 또한 산화스트레스 환경에서 세포사억제단백질인 Bcl-2 발현은 대조군에서 유의한 감소를 보였으나 aBC 과발현군에서는 감소하지 않고 대조군보다 유의하게 증가하였다. 본 연구 결과는 희소돌기아교전구세포 내 과발현된 aBC가 산화스트레스 환경에서 Akt 신호전달경로의 하향조절을 억제할 수 있으며, 이를 통해 세포사억제단백질 발현을 증가시키고 세포사유도단백질 발현을 억제함을 보여주었다. 이는 aBC가 산화스트레스에 의한 세포사로부터 희소돌기아교전구세포를 보호하는 역할을 할 수 있음을 시사한다.
목차
I. 서 론 1II. 실험재료 및 방법 41. 희소돌기아교전구세포 일차배양 4(1) 세포 분리 4(2) 신경아교세포 혼합배양 및 희소돌기아교세포 분리 5(3) 희소돌기아교전구세포 배양 52. 렌티바이러스 플라스미드(lentiviral plasmid) 제작 및 생산 6(1) aBC 유전자를 삽입한 렌티바이러스 플라스미드(pLVX-aBC plasmid) 제작 6(2) 재조합 렌티바이러스(pLVX-aBC) 생산 63. 희소돌기아교전구세포로의 렌티바이러스 감염 74. 산화스트레스 유도 75. 면역형광염색 86. 웨스턴 블롯(Western blot) 87. Hoechst 염색과 MTT 분석 98. 통계분석 9III. 실험결과 111. 희소돌기아교전구세포의 aBC 과발현 112. 산화스트레스 환경에서 희소돌기아교전구세포의 aBC 과발현 113. 산화스트레스 환경에서 세포 내 aBC 과발현과 세포생존율 124. 산화스트레스 환경에서 aBC 과발현과 Akt 활성 125. 산화스트레스 환경에서 aBC 과발현과 세포사조절단백질 발현 13IV. 고 찰 25V. 결 론 30참고문헌 31
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