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논문 기본 정보

자료유형
학위논문
저자정보

박수용 (부산대학교, 부산대학교 대학원)

지도교수
정일두
발행연도
2017
저작권
부산대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

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이 논문의 연구 히스토리 (3)

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본 연구에서는 생분해성 및 생체적합성을 가진 L-tyrosine urethane (LTU)를 L-tyrosine을 기반으로 생분해성 chain extender를 합성하였으며, 이를 통해 PEG 및 HMDI로 뛰어난 생분해성 및 생체적합성을 가지는 LTU를 중합하였습니다. LTU는 chloroform에 용해되며, 우리는 이를 통해 double emulsion (water?in?oil?in?water)method로 endocytosis를 위한 적합한 사이즈의 나노파티클을 만들었습니다. 나노파티클 가장 내부에 존재하는 water pocket에는 세포흡착을 확인하기 위한 FITC-BSA 및transfection 효율을 확인하기 위한 pDNA가 존재합니다. 그 다음 바깥에 존재하는 oil상은 chloroform에 용해되어 있는 LTU가 존재하며 나노파티클의 표면은 PEG로 개질(PEGylation)되어 있습니다.
이는 단백질 가수분해 효소 및 항체들로부터의 접근을 저지해 주며 친수성질의 향상을 통하여 체내의 용해도를 높여주는데, 그 결과로 체내순환 시간이 늘어나 많은 나노파티클 내부의 약물 및 유전자들을 세포내로 전달이 가능합니다. 나노파티클의 구 형태 및 사이즈는 DLS와TEM으로부터 확인되었습니다. Transfection 효율을 알아보기 전FITC-BSA를 통해 LX2 세포에서 세포흡착 테스트를 진행하였으며 성공적인 흡착이 confocal laser microscope를 통하여 확인되었습니다. 방출 테스트에서는 first order kinetics를 보여주며 서방형 방출의 모델을 보여주었습니다. Transfection의 효율을 높이기 위한LPEI가 DNA와 복합체를 이루어 방출되는 것을 확인하였습니다. 마지막으로 transfection 효율 및 독성 테스트를 진행하였고, 적절한 LPEI의 농도를 확인하였으며 동시에 X-gal assay를 통해 성공적인 transfection 테스트를 마쳤습니다. 이러한 특징들은 약물전달 시스템에서도 매우 이상적입니다. 그러므로 LTU 나노파티클은 유전자 전달에서 뿐만 아니라 약물전달의 응용까지 아우르는 새롭고 기능이 뛰어난 물질이라 할 수 있습니다.

목차

CHAPTER 1. INTRODUCTION 1
CHAPTER 2. THEORETICAL BACKGROUND 4
2-1. Gene therapy 4
2-1-1. Gene therapy using viral vector 5
2-1-1-1. Advantage and disadvantage 5
2-1-2. Gene therapy using non-viral vector 6
2-1-2-1. Advantage and disadvantage 6
2-2. Polymer as gene delivery carrier 7
2-2-1. Urethane for biomedical applications 7
2-2-2. L-tyrosine 8
2-2-3. L-tyrosine polyurethane (LTU) 9
2-2-4. Linear polyethyleneimine (LPEI) 10
2-2-4-1. Cytotoxicity of PEI 10
2-2-4-2. PEI-DNA complex by electorstatic attarction 10
2-2-4-3. Proton sponge effect of LPEI 11
2-2-5. LTU nanoparticles double emulsion method 12
2-3. Biodegradable nanoparticles for drug or gene delivery 13
CHAPTER 3. EXPERIMENTAL 14
3-1. Materials 14
3-2. Measurement 16
3-2-1. Spectroscopic measurement 16
3-2-2. Microscopic measurement 16
3-3. Preparation of LTU nanoparticles for gene delivery application 17
3-3-1. Syntehsis of LTU 17
3-3-1-1. Tyrosine hexyl ester (TH) 17
3-3-1-2. Desaminotyrosyl tyrosine hexyl ester (DTH) 19
3-3-1-3. L-tyrosine polyurethane (LTU) 21
3-3-2. Preaparation of FITC-BSA LTU nanoparticles (Double-emulsion) 23
3-3-3. Preaparation of DNA-LPEI LTU nanoparticles (Double-emulsion) 23
3-3-4. Cell uptake study of FITC-BSA LTU NPs 26
3-3-5. Transfection study of DNA-LPEI LTU NPs 26
CHAPTER 4. RESULTS AND DISCUSSION 27
4-1. Characterization of TH, DTH, LTU 27
4-2. FITC-BSA LTU nanoparticles 29
4-2-1. Diameter distribution and encapsulation 29
4-2-2. In vitro test of FITC-BSA LTU NPs 31
4-3. DNA-LPEI LTU nanoparticles 33
4-3-1. Diameter distribution 33
4-3-2. Encapsulation of pDNA confirmation 34
4-3-3. Determination of DNA loading and release of DNA-LPEI complex 36
4-3-4. Cumulative release test of DNA-LPEI LTU NPs 38
4-3-5. Transfection and cytotoxicity studies of DNA-LPEI LTU NPs 39
CHAPTER 5. CONCLUSIONS 43
REFERENCES 44
ABSTRACT (KOREAN) 46

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