Prunin이 인간각질형성세포 (HaCaT)에서 활성산소종 소거를 통한 세포외기질 분해 억제 효과 :Inhibitory effects of prunin on extracellular matrix degradation by reactive oxygen species scavenging in HaCaT human keratinocytes

류지영

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자료유형: 학위논문

저자정보: 류지영 (건국대학교, 건국대학교 대학원)

지도교수: 안성관

발행연도: 2017

저작권: 건국대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수5

이 논문의 연구 히스토리 (2)

2019

Prunin의 자외선 B에 의해 손상된 인간 각질형성세포 (HaCaT)에 대한 광노화 억제 효과

류지영 , 이승자 , 임계화 외 4명 아시안뷰티화장품학술지 2019.01 학술저널

2017

Prunin이 인간각질형성세포 (HaCaT)에서 활성산소종 소거를 통한 세포외기질 분해 억제 효과

류지영 생물공학 2017.01 학위논문

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Prunin은 플라보노이드(flavonoid)에 속하는 플라바논(flavanones) 배당체로서 왕벚나무 Prunus yedoensis Matsumura (장미과) 등 벚꽃재에 함유되어있으며 항산화, 항균, 혈당저하 및 혈행개선 등의 의학, 약학, 화학 분야 관련 연구가 진행 되었으나 화장품에 관련된 연구는 전무한 실정이다. 그러므로 본 연구에서는 prunin을 농도별로 HaCaT에 전처리 후 UVB를 조사하여 산화적인 스트레스를 가해 prunin의 항산화, 항염, 광노화에 대한 효과를 검증하였으며 prunin의 노화에 효능을 가진 화장품 소재로서의 가능성을 확인하였다. Prunin의 효능 평가는 water-soluble tetrazolium salt-1 (WST-1) assay를 이용한 세포생존율 측정, dichlorofluorescein diacetate (DCFDA)를 이용한 활성산소 측정, quantitative real-time PCR (qRT-PCR), activator protein-1 (AP-1) luciferase assay, Procollagen type I을 enzyme linked immunoassay (ELISA)를 통해 검증하였다. UVB로 감소한 세포생존율은 prunin 처리시 농도 의존적으로 증가하였다. 세포 내 ROS 정량분석법 측정에서는 prunin 처리시 농도 의존적으로 감소하였으며 항산화와 관련 있는 유전자인 GPx1, SOD1, CAT, HO-1, NRF2, NQO1 발현 량은 prunin 처리시 농도 의존적으로 증가하였다. 염증과 피부의 노화에 있어서 중추적 역할을 하는 NF-κB 활성도 분석 결과 prunin 농도가 증가함에 따라 NF-κB 활성도가 감소하였으며 염증반응과 관련된 NF-κB 하위 유전자 IL-6, IL-8, COX2, TNF-α, PAR2 유전자 발현 량 또한 prunin 처리시 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였다. 산화적인 스트레스에 의한 광노화는 MMP1 유전자, AP-1 전사활성은 prunin 처리시 농도 의존적으로 감소하였고 COL1A1 유전자 발현량과 Type I procollagen은 prunin 처리시 농도 의존적으로 증가하여 광노화에 효과가 있음을 확인하였다. 본 연구 결과를 통해 prunin이 UVB에 의해 손상된 인간 각질형성세포인 HaCaT의 생존율을 회복시켜 세포를 보호하고 노화에 영향을 주는 ROS를 감소하고 항산화, 항염, 광노화의 효과를 확인한 결과 노화예방에 효능을 가진 화장품 원료로서의 주목할 만한 가치가 있다고 사료된다.

Prunin is a flavanone glycoside in line of flavonoid, which is found in cherry blossoms of Prunus yedoensis Matsumura (rose family). This study was performed on anti-oxidation, anti-bacterial activity, hypoglycemia and blood circulation in the field of medicine, pharmacy and chemistry. This study was to observe the anti-oxidative, anti-inflammatory and anti-photoaging effects of prunin and the possibility as cosmetic materials. To achieve this, cellular and biological effects of prunin were examined against oxidative stress in ultraviolet (UV) B-induced aging model of human keratinocyte HaCaT cells. Based on cell toxicity test of prunin, experimental concentration of prunin was determined under 40 μM in HaCaT cells. The WST-1 assay showed the cell protective effect of prunin against UVB-induced toxicity. Decreased cell viability was restored in UVB-irradiated HaCaT cells by prunin in a dose-dependent manner. To examine whether prunin regulates cellular anti-oxidant activity, intracellular ROS level was examined. DCFHDA analysis showed that the intracellular ROS levels was decreased by prunin reatment in UVB-irradiated HaCaT cells. Moreover, the transcriptional cepression of GPx1, SOD1, CAT, HO-1, NRF2, NQO1 genes, which are have funcion on ROS scavenging, were upregulated by prunin treatment in a dose-dependent manner. To examine the anti-inflammatory effect of prunin in UVB-irradiated HaCaT cells, the proinflammatory cytokines TNF-α, IL-6, IL-8, COX2 and PAR2 expressions were measured by qRT-PCR. Cytokines were downregulated by treatment of prunin in UV-B-exposed HaCaT cells in a dose-dependent manner. To examine the anti-aging activity of prunin in UVB-irradiated the expression of a extracellular matrix (ECM) modulating enzymes, MMP-1 was analyzed. Prunin decreased the transcriptional expression of MMP-1 genes. AP-1 driven luciferase assay was performed to determine whether the decreased expression of MMP1 by prunin was due to AP-1, a major transcription factor of MMP1. As a result, the AP-1 promoter strength was decreased by prunin. Moreover, the expression of procollagen type 1 and COL1A1 were upregulated by treatment of prunin in UVB-irradiated HaCaT cells suggestion that prunin effectivelly restored the UVB-induced damage in HaCaT cells. In conclusion, these results demonstrate that prunin has a potential as an anti-phtoaging cosmetic ingredient with anti-oxidant, anti-inflammatory propertees.

#Prunin #인간각질형성세포 #피부노화 #항산화 #항염 #광노화 #자외선B

Ⅰ. 서론 1
1. prunin 1
2. 항산화 기전 4
3. 염증발생 기전 9
4. 광노화 기전 11
Ⅱ. 연구 재료 및 방법 14
1. 세포배양 및 시료처리 14
1) 세포 배양 14
2) 시료 처리 14
2. Cell viability 측정 15
3. RNA 추출과 cDNA 제조 15
4. Quantitative real-time PCR 16
5. 세포 내 활성산소종(ROS) 측정 18
6. AP-1 luciferase assay 18
7. Procollagen type I by ELISA 19
8. 통계처리 19
Ⅲ. 연구결과 및 고찰 20
1. Prunin의 세포독성 및 UVB에 대한 세포보호 효과 20
1) Prunin의 세포독성 20
2) UVB에 대한 prunin의 세포보호 효능 22
2. UVB를 조사한 인간각질형성세포(HaCaT)에서 Prunin의 항산화 효과 24
1) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 ROS 제거 효능 24
2) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 GPx1 mRNA 발현 변화 26
3) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 SOD1 mRNA 발현 변화 28
4) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 CAT mRNA 발현 변화 30
5) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 HO-1 mRNA 발현 변화 32
6) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 NRF2 mRNA 발현 변화 34
7) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 NQO1 mRNA 발현 변화 36
3. UVB를 조사한 HaCaT에서 Prunin 염증억제 효과 38
1) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 IL-6 mRNA 발현 변화 38
2) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 IL-8 mRNA 발현 변화 40
3) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 COX-2 mRNA 발현 변화 42
4) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 TNF-α mRNA 발현 변화 44
5) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 PAR2 mRNA 발현 변화 46
4. UVB를 조사한 HaCaT에서 Prunin 광노화 효과 48
1) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 MMP1 mRNA 발현 변화 48
2) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 AP-1 전사 활성 변화 50
3) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 Type I procollagen 변화 52
4) HaCaT에서 prunin이 UVB에 대한 COL1A1 mRNA 발현 변화 54
5. 고찰 56
1) Prunin의 항산화 효과 57
2) Prunin의 염증 억제 효과 58
3) Prunin의 광노화 효과 58
Ⅳ. 결론 60
참고문헌 63
국문초록 78

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