천연물로부터 세균성 질염 치료를 위한 항균성 물질의 분리 및 정제 :Separation and purification of antimicrobial substances from natural materials for treatment of microbial vaginosis

장지은

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자료유형: 학위논문

저자정보: 장지은 (계명대학교, 계명대학교 대학원)

지도교수: 김현수

발행연도: 2019

저작권: 계명대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수54

이 논문의 연구 히스토리 (3)

2019

천연물로부터 세균성 질염 치료를 위한 항균성 물질의 분리 및 정제

장지은 생물학과 2019.01 학위논문

2018

정향으로부터 세균성 질염 치료를 위한 항균성 물질의 분리 및 정제

장지은 , 강동희 , 윤재우 외 1명 KSBB Journal 2018.12 학술저널

2017

대황으로부터 세균성 질염 치료를 위한 항균성 물질의 분리 및 특성

장지은 , 강동희 , 윤재우 외 1명 KSBB Journal 2017.06 학술저널

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본 연구에서는 질염 유발 균주에 항균활성이 있는 천연물 대황과 정향을 다양한 용매로 추출하여 유해균주에서 가장 높은 항균활성을 나타내며 유용 균주에서는 항균활성을 나타내지 않는, 물질의 분리 및 정제를 수행 후 그 물질의 항균활성능을 확인하고자 하였다. 천연물의 methanol 추출물 시료는 열수 추출물, ethyl acetate 추출물 그리고 ethanol 추출물 시료에 비해 질염 유발 균주에서 높은 항균활성을 확인할 수 있었다.
TLC 수행 결과, 질염 유발 균주에서 항균활성은 대황의 경우 C. gleum KCTC 2904, P. mirabilis KCTC 2510은 Rf값이 0.83인 spot에서 확인되었고, C. albicans ATCC 10231은 Rf값이 0.96인 spot에서 확인되었다. 정향의 경우 S. paucimobilis KCTC 2834, C. albicans ATCC 10231, C. gleum KCTC 2904와 P. mirabilis KCTC 2510 모두 Rf값이 0.85인 spot에서 확인되었다.
대황과 정향의 methanol 추출물은 silica gel column chromatography를 통해 질염 유발 균주에 항균활성을 나타내는 부분으로 예상되는 물질을 분리하였다. 각 분획에서 항균활성이 높은 분획은 HPLC를 통해 분석 및 분리하고자 하였다. 그 결과, 대황은 18분대 peak에서, 정향은 25분대 peak에서 항균활성을 확인하였다.
HPLC를 통해 분리한 정향은 NMR을 통해 물질규명을 하였다. 정향의 항균활성 물질의 NMR을 수행한 결과, eugenol로 확인되었다.
Eugenol의 항균활성은 정향의 methanol 추출물보다 더 큰 항균활성이 확인되었으며, 유용 유산균주에서는 항균활성을 확인할 수 없었다. 이에 질염 치료에 효과가 있을 것으로 사료된다.

Rheum palmatum and Syzygium aromaticum Merrill et Perry have traditionally been used as preventive agents and medications against bacterial illnesses and infection. This study was conducted to isolate and purify the antimicrobial substances from R. palmatum and S. aromaticum, which are effective against microbial vaginosis, but did not affect Lactobacillus coleohominis KCTC 21007.
While hot water and ethyl acetate extracts from R. palmatum and S. aromaticum did not show any antimicrobial activity using the paper disc method, methanol extracts at 50 mg/mL produced inhibitory zones on nutrient agar plates with Chryseobacterium gleum KCTC 2904, Sphingomonas paucimobilis KCTC 2834 and Candida albicans ATCC 10231.
Silica gel column chromatography and thin-layer chromatography (TLC) were conducted to isolate predicted antimicrobial materials from methanol extracts from R. palmatum and S. aromaticum. Among 105 fractions obtained by silica gel column chromatography, the TLC productions of R. palmatum in fraction No. 13 showed antimicrobial activity against C. gleum KCTC 2904, P. mirabilis KCTC 2510 at the Rf 0.83 spot, and C. albicans ATCC 10231 at the Rf 0.96 spot. In terms of S. aromaticum, all antimicrobial activity against S. paucimobilis KCTC 2834, C. albicans ATCC 10231, C. gleum KCTC 2904 and P. mirabilis KCTC 2510 was observed in the spot of Rf 0.85 produced by the TLC of fraction No. 23 among 95 fractions.
High performance liquid chromatography (HPLC) was then performed to isolate and purify the antimicrobial substances in the fractions. Single peaks achieved at a retention time (Rt) of 18.988 min in R. palmatum and 25.306 min in S. aromaticum displayed high antimicrobial activity.
The antimicrobial substance from S. aromaticum isolated by HPLC was identified as eugenol using nuclear magnetic resonance (NMR). For confirmation, the experimental process was conducted again with eugenol in place of the methanol extracts, and the antimicrobial activity of eugenol was more effective than a methanol extract from S. aromaticum against microbes, but not against Lactobacillus coleohominis KCTC 21007. Therefore, this antimicrobial substance must be effective for treatment of microbial vaginosis.

#천연물 #질염 #항균성 물질

제 1 장 서 론 1
제 2 장 재료 및 방법 5
2.1 천연물의 추출 5
2.2 시험균주의 선정 및 배양 6
2.2.1 시험균주 및 사용배지 6
2.2.2 시험균주의 계대배양 7
2.3 천연물의 항균활성 8
2.3.1 천연물의 시료 제조 8
2.3.2 천연물의 항균활성 확인 8
2.4 천연물에서 유용물질 분리 9
2.4.1 SGCC 9
2.4.2 TLC 10
2.4.3 HPLC 11
2.4.4 분별추출(fractional extraction) 12
2.4.5 NMR 13
제 3 장 결과 및 고찰 14
3.1 천연물의 항균활성 14
3.1.2 대황 추출물의 항균활성 14
3.1.3 정향 추출물의 항균활성 16
3.1.4 Eugenol의 항균활성 19
3.2 대황 추출물의 항균활성 물질 분리 및 확인 21
3.2.1 SGCC 21
3.2.2 TLC 23
3.2.3 HPLC 26
3.3 정향 추출물의 항균활성 물질 분리 및 확인 29
3.3.1 SGCC 29
3.3.2 TLC 31
3.3.3 HPLC 35
3.4 항균활성 물질의 규명 38
3.4.1 분별추출 및 SGCC 38
3.4.2 HPLC 40
3.4.3 NMR 42
제 4 장 요 약 45
참고문헌 49
영문초록 54
국문초록 57

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