목적: 니코틴의 농도에 따라 구강내 치은 섬유아세포의 증식 및 치유억제에 어떠한 영향을 주는지 확인하고자 하였다. 방법: 본 연구는 치은 섬유아세포를 이용한 니코틴의 치은 섬유아세포의 증식억제를 규명하기 위해 치은 섬유아세포에 0.1, 1, 5, 및 10 mM 농도로 니코틴을 투여하여 세포의 생존 능력을 평가하고, 세포 사멸을 평가하기 위해 치은 섬유아세포에 비사멸 농도인 니코틴 0.1 mM에 Annexin V-FITC, 요오드화 프로피디엄을 반응시켰다. 또한 염증성 사이토카인의 발현을 측정하기 위해 치은 섬유아세포에 니코틴 1, 10, 100 μM을 투여하여 Real-time Reverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR), Enzyme-liked immunosorbent assay(ELISA)검사를 시행하였고, 니코틴 1, 10 μM에 Escherichia coli lipopolysaccharide (EC LPS), Tannerella forsythia lipopolysaccharide (TF LPS)를 추가 처치하고 RT-PCR, ELISA 검사를 시행하여 염증성 사이토카인의 발현을 측정하였다. 그리고 Fibroblast Growth Factor(FGF)에 니코틴 1, 10, 100 μM을 추가 처치하고 세포의 증식 및 상처치유를 평가하는 실험 연구를 시행하였다. 결과: 니코틴의 농도(0.1, 1, 5, 10 mM)가 높아질수록 치은 섬유아세포의 생존능력이 감소하였다. 저농도(0.1 mM)의 니코틴을 투여 시, 24시간 노출 시 치은 섬유아세포 사멸이 발생하는 것으로 나타났고 48시간 노출 시 치은 섬유아세포의 사멸과 괴사가 함께 발생하는 것으로 나타났다. 염증성 사이토카인은 니코틴의 농도(1, 10, 100 μM)가 높아질수록 높아졌다. 염증성 사이토카인이 낮았던 저 농도(1, 10 μM)의 니코틴에 EC LPS, TF LPS를 추가 처치하였을 때 염증성 사이토카인의 발현을 낮추는 것으로 나타났다. FGF에 니코틴을 투여 시, 농도(1, 10, 100 μM)가 높아질수록 세포의 생존능력이 감소하였다. 결론: 니코틴의 농도가 높을수록 치은 섬유아세포의 생존능력이 저하되고 염증성 사이토카인 역시 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 저농도의 니코틴은 염증성 사이토카인의 발현을 낮추는 것으로 보였으나, 성장인자(FGF)에 니코틴을 투여했을 때 농도가 높아질수록 세포의 생존능력이 낮아지는 것으로 보아 저농도에서 염증성 사이토카인 수치가 낮아진 것은 세포 활성화를 낮추고 세포 반응이 저해되어 염증 수치가 낮아진 것으로 사료되었다. 따라서 니코틴은 치은 섬유아세포의 증식과 상처치유를 저해하는 것으로 나타났다.
Objective: To investigate the effect of nicotine on wound healing of the oral cavity, nicotine was treated on human gingival fibroblast with high and low concentration. Methods: 0.1, 1, 5, 10 mM of nicotine was administered on gingival fibroblast for evaluating the survival capability of the cell. 0.1 mM of nicotine, which is nonapoptotic concentration, was administered to evaluate apoptosis with Annexin V-FITC/Propidium Iodide cell staining. 1, 10, 100 μM of nicotine was administered to measure the expression of inflammatory cytokine. This was measured with RT-PCR and ELISA process. FGF was treated with an additional 1, 10, 100 μM of nicotine to evaluate cell proliferation and wound healing. Results: As the concentration of nicotine is getting higher (0.1, 1, 5, 10 mM), Survival capability of the cell is reduced. When the cell is exposed low concentration of nicotine (0.1 mM) for 24 hours, apoptosis occurs moreover if the cell is exposed for 48 hours cell apoptosis occurs with necrosis. As the concentration of nicotine is getting higher (1, 10, 100 μM), the More inflammatory cytokine is expressed. When EC LPS, TF LPS was combined with a low concentration of nicotine (1, 10 μM), expression of inflammatory cytokine is suppressed. Level of FGF is decreased, As the concentration of nicotine is getting higher (1, 10, 100 μM). Conclusion: High concentration of nicotine decline survival capability of cell and increase expression of inflammatory cytokine. It seems that low concentration of nicotine decline expression of inflammatory cytokine. However, when nicotine was administered on FGF, As concentration getting higher, decline effect of low concentration on expression of survival capability of the cell was reduced. Decreased inflammatory cytokine on the lower concentration of nicotine is considered due to suppressed cell activity and reaction. In conclusion, nicotine interferes with the wound healing process of gingival fibroblast. To accept the wound healing process after a surgical, dental procedure, cessation of smoking is recommended.
목차
Ⅰ. 서론 1Ⅱ. 재료 및 방법Ⅲ. 실험결과Ⅳ. 총괄 및 고안 25Ⅴ. 결론 30참고문헌 32영문요약 37