식물성 천연물로부터 분리한 질염 유발 병원균의 억제물질에 대한 특성 연구 :

박상희

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자료유형: 학위논문

저자정보: 박상희 (계명대학교, 계명대학교 대학원)

지도교수: 김현수

발행연도: 2020

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

2020

식물성 천연물로부터 분리한 질염 유발 병원균의 억제물질에 대한 특성 연구

박상희 생물학과 2020.01 학위논문

2019

정향에서 분리한 질염 유발 병원균 억제 물질 Eugenol의 특성

박상희 , 고희선 , 윤재우 외 1명 KSBB Journal 2019.12 학술저널

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본 연구는 질 내 유용 유산균은 억제하지 않으면서 질염 유발 균주에 대해 항균력을 가지는 식물성 천연물을 탐색하여 유효물질을 분리하여 추출물질의 특성을 확립하고자 하였다. 질염 유발 균주는 억제하면서 질 내 유용 유산균은 억제하지 않는 식물성 천연물을 탐색한 결과, 정향 methyl alcohol 추출물의 항균활성 결과로 C. albicans ATCC 28367에서 7 mm, C. gleum KCTC 2904에서 8 mm, S. paucimobilis KCTC 2834에서 13 mm의 inhibitory zone이 확인되었다. 정향에서 분리한 항균력을 가지는 물질인 eugenol은 DPPH free radical 소거능, ABTS free radical 소거능 실험을 수행한 결과 commercial eugenol보다 항산화활성이 높게 측정되었다. 질 상피 세포주인 VK2/E6E7 ATCC CRL-2616은 500 nM의 정향에서 분리한 eugenol (IESA)을 처리하였을 때 89%의 세포 생존율을 나타내었다. 질염 유발 균주 4종 중 3종이 Gram (-)균으로, Gram (-)균이 가지는 자극유발원인 LPS를 VK2/E6E7 ATCC CRL-2616에 처리하였다. VK2/E6E7 ATCC CRL-2616에 500 nM의 IESA를 3시간 처리하였으며, LPS로 자극을 주고 단백질을 회수하였다. 회수한 단백질로 western blotting을 수행한 결과, IESA는 LPS로 세포에 자극을 주었을 때 LPS 처리시간이 60～90분 사이에 p38의 활성화를 억제하는 것으로 확인되었다. 칸디다성 질염을 유발하는 균주는 C. albicans로 유발된 반응에 대한 IESA의 효과를 확인하기 위해 ELISA를 수행하였다. ELISA 결과로 C. albicans 처리시간이 12시간일 때 IESA를 처리하지 않았을 때보다 처리하였을 때 TNF-α의 양은 48.32% 감소하였으며, IL-8의 양은 72.58%, IP-10의 양은 1.8% 감소하였다. IP-10의 생산에는 미비한 영향을 미치나 TNF-α와 IL-8의 생산을 억제하는 효과가 있음을 확인했다. 이러한 결과로 IESA는 질 내 유용 유산균은 저해하지 않으면서 질염 유발 균주에서는 항균활성을 나타내었으며, 질 상피 세포 인 VK2/E6E7 ATCC CRL-2616에 LPS를 처리하였을 때는 IESA에 의해 p38의 활성화가 억제되었고, C. albicans를 처리하였을 때도 IESA에 의해 TNF-α와 IL-8의 양이 감소하였다. 이에 IESA의 세균성 질증 및 칸디다성 질염의 치료제로서의 가능성을 확인하였다.

제1장 서 론
제2장 재료 및 방법
2.1 균주 및 세포
2.1.1 균주 및 사용배지
2.1.2 세포 및 사용배지
2.2 사용 식물의 추출
2.2.1 사용된 식물성 천연물
2.2.2 식물성 천연물의 추출
2.3 항균활성
2.4 정향에서 eugenol 추출
2.5 항산화활성 측정
2.5.1 DPPH free radical 소거능
2.5.2 ABTS free radical 소거능
2.6 세포실험
2.6.1 세포배양
2.6.2 세포독성실험(MTT assay)
2.7 Western blotting
2.7.1 LPS 처리
2.7.2 SDS-PAGE
2.7.3 Transfer
2.7.4 Blocking
2.7.5 항원항체반응
2.8 ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)
2.8.1 Candida albicans ATCC 28367 처리
2.8.2 Immunoassay
2.9 통계분석
제3장 결과 및 고찰
3.1 식물성 천연물 추출물의 항균활성
3.2 정향에서 분리한 eugenol의 HPLC pattern 분석
3.3 항산화활성
3.3.1 DPPH free radical 소거능
3.3.2 ABTS free radical 소거능
3.4 세포독성
3.5 Western blotting
3.6 ELISA
제4장 요 약
참고문헌
영문초록
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