붉나무는 옻나무과에 속하는 낙엽소교목으로 염증, 천식 및 건선에 효과가 있다고 알려져 있다. 본 연구에서는 붉나무 열매 Ethanol extract(ET), Ethyl acetate fraction(EA) 및 Butanol fraction(BT)의 천연화장품 소재로의 활용 가능성을 평가하기 위하여 독성평가. 항산화 활성, 항노화 활성, 항균 활성, UVB로 유도된 ROS 저해 효과를 측정하고 화장품 제형에 적용하여 안정성을 확인하였다. 독성평가는 각질형성세포인 HaCaT 세포와 Zebrafish embryo를 이용하여 세포생존율과 embryo의 응고율과 부화율로 평가하였다. 항산화 활성은 DPPH 라디칼 소거 활성, SOD 유사 활성, FRAP 활성, ABTS+ 라디칼 소거 활성으로 평가하였고, 0.1-1.0mg/mL의 농도에서 시행하였다. 항노화 활성은 Elastase 및 Collagenase 저해 활성을 통하여 평가하였고, 0.1-1.0mg/mL의 농도에서 시행하였다. UVB로 유도된 ROS 저해 효과는 HaCaT 세포와 Zebrafish embryo를 이용하여 UVB로 유도된 ROS가 DCFH-DA와 결합하여 발현되는 형광의 세기를 측정하여 평가하였다. 항균활성은 Staphylococcus aureus(S. aureus), Staphylococcus epidermidis(S. epidermidis), Escherichia coli(E. coli), Pseudomonas aeruginosa(P. aeruginosa), Candida Albicans(Candida. A)에 대하여 Paper disc법으로 생육저해환을 확인하였고 최소저해농도(MIC)를 평가하였으며 Challenge test를 통하여 화장품 제형에서 항균 활성을 평가하였다. 화장품 제형에서의 안정성은 pH, 점도, Turbiscan® LAB을 이용하여 입자 거동의 양상을 관찰하였다. ET, EA, BT는 5μg/mL이하의 농도에서 독성은 관찰되지 않았다. 항산화 활성은 ABTS+ 라디칼 소거 활성, DPPH 라디칼 소거 활성, SOD 유사 활성, FRAP 활성 순으로 측정되었으며, 농도 의존적으로 효과가 있었다. 항노화 활성은 Elastase 저해 활성보다 Collagenase 저해 활성이 뛰어났으며 농도 의존적으로 효과가 있었다. Paper disc법으로 생육저해환을 측정한 결과 ET, EA, BT 모든 시료에서 S. aureus, S. epidermidis, E. coli, P. aeruginosa 균주에서 생육저해환이 관찰되었고 BT에서는 Candida. A 균주에 대한 생육저해환이 추가로 관찰되었다. MIC 측정 결과 EA 시료가 S. aureus, S. epidermidis, E. coli, P. aeruginosa 균주에 대하여 가장 낮은 최소저해농도를 보였다. Challenge test를 통하여 제형 내에서 항균 활성을 측정한 결과 ET, EA, BT 모든 시료에서 S. aureus, S. epidermidis, E. coli, P. aeruginosa 균주에서 효과가 있었고 BT는 Candida. A 균주에서도 효과가 있었다. UVB로 유도된 ROS 저해 효과는 EA > ET > BT 순이였으며 농도 의존적으로 DCFH-DA 형광의 세기가 감소하였다. 화장품 제형에서의 안정성 시험의 결과 pH, 점도, 입자의 거동을 측정한 결과 control과 유사한 양상을 보여 안정하였다. 따라서 본 연구의 결과는 붉나무 열매 추출물이 천연 기능성 소재로 활용 가능할 것으로 사료 된다.
Rhus javanica L. is a deciduous tree belonging to the family Anacardiaceae. In this study, Efficacy evaluation(toxicity, antioxidant activity, antimicrobial activity, UVB-induced ROS inhibition measured by ethanol extract(ET), ethyl acetate fraction(EA), butanol fraction(BT) of Rhus javanica L. fruit as natural cosmetic materials and Stability was confirmed by applying to a cosmetic formulation. Toxicity was evaluated by cell viability, embryo coagulation rate and hatching rate using HaCaT cells and Zebrafish embryos. Antioxidant activity was evaluated as DPPH radical scavenging activity, SOD-like activity, FRAP activity, ABTS+ radical scavenging activity, and was performed at a concentration of 0.1-1.0mg/mL. Anti-aging activity was evaluated through Elastase and Collagenase inhibition activity, and was performed at a concentration of 0.1-1.0mg/mL. The effect of UVB-induced ROS inhibition was evaluated by measuring the intensity of fluorescence expressed by combining UVB-induced ROS with DCFH-DA using HaCaT cells and Zebrafish embryo. Antimicrobial activity was evaluated in five strains of Staphylococcus aureus(S. aureus), Staphylococcus epidermidis(S. epidermidis), Escherichia coli(E. coli), Pseudomonas aeruginosa(P. aeruginosa), and Candida Albicans(Candida. A). Growth inhibition was measured by paper disc method and minimum inhibition concentration(MIC) was measured. Antibacterial activity was measured in the cosmetic formulation through the Challenge test. Stability in cosmetic formulations was observed by using pH, viscosity, and Turbiscans LAB. Toxicity wasn''t observed for ET, EA and BT at concentrations below 5μg/mL. Antioxidant activity was measured in the order of ABTS+ radical scavenging activity > DPPH radical scavenging activity > SOD-like activity > FRAP activity and was effective in a concentration-dependent manner. The anti-aging activity was superior to the collagenase inhibition activity than the Elastase inhibition activity and had a concentration-dependent effect. Antibacterial activity in cosmetic preparations with ET, EA and BT was effective in all strains. The effect of UVB-induced ROS inhibition was EA> ET> BT, and the intensity of DCFH-DA fluorescence decreased depending on the concentration. As a result of the stability test in the cosmetic formulation, the pH, viscosity and behavior of the particles were similar to the control. Therefore, the results of this study suggest that Rhus javanica L. extract is highly likely to be used as a natural cosmetic material.
목차
Ⅰ. 서 론 1Ⅱ. 재료 및 방법 71. 실험 재료 71) 붉나무 열매 72) 시약 및 기기 82. 실험 방법 101) 붉나무 열매 추출물 제조 102) 붉나무 열매 추출물의 독성평가 12(1) in vitro 수준에서 독성평가 11① 세포 배양 11② 세포 생존율 측정 11(2) in vivo 수준에서 독성평가 12① 부화율 및 응고율 측정 123) in vitro 수준에서 붉나무 열매 추출물의 효능 평가 13(1) 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 분석 13① 총 폴리페놀 함량분석 13② 총 플라보노이드 함량분석 14(2) 붉나무 열매 추출물의 항산화 효능 평가 15① DPPH 전자공여능 측정 15② SOD anion radical 소거능 측정 16③ 환원력 측정 17④ ABTS radical cation decolorization 18(3) 붉나무 열매 추출물의 항노화 효능 평가 19① Elastase inhibition에 의한 항노화 측정 19② Collagenase inhibition에 의한 항노화 측정 20(4) UVB로 유도된 ROS 저해 효과(HaCaT cell) 21(5) 붉나무 열매 추출물의 항균 효능 평가 22① 균주 배양 22② 생육저해환 측정 23③ Minimum Inhibition Concentration(MIC) 24④ Challenge test 254) in vivo 수준에서 붉나무 열매 추출물의 효능 평가 27(1) UVB로 유도된 ROS 저해 효과(Zebrafish) 275) 제형 내에서 붉나무 열매 추출물의 효능 및 안정성 평가 28(1) 붉나무 열매 추출물의 항산화제 보호 효과 28(2) 붉나무 열매 추출물을 첨가한 에멀전 제조 30(3) 붉나무 열매 추출물을 첨가한 에멀전의 안정성 평가 32① pH 측정 32② 점도 측정 32③ Turbiscan® LAB 평가 32Ⅲ. 결과 및 고찰 331) 붉나무 열매 추출물의 독성평가 33(1) HaCaT cell의 생존율 측정 결과 33(2) Zebrafish embryo에서의 발생 독성평가 결과 342) in vitro 수준에서 붉나무 열매 추출물의 효능 평가 36(1) 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량분석 결과 36(2) 붉나무 열매 추출물의 항산화 효능 평가 37① DPPH radical scavenging activity 37② SOD-like activity 38③ FRAP activity 39④ ABTS+ radical scavenging activity 40(3) 붉나무 열매 추출물의 항노화 효능 평가 41① Elastase inhibition activity 결과 41② Collagenase inhibition activity 결과 42(4) HaCaT cell에서 UVB로 유도한 ROS의 저해 효과 43(5) 붉나무 열매 추출물의 항균 효능 평가 46① 생육저해환 측정 결과 46② 붉나무 열매 추출물의 최소저해농도 49③ 가용화 제형에서 방부 효능 평가 503) in vivo 수준에서 붉나무 열매 추출물의 효능 평가 56(1) Zebrafish에서 UVB로 유도된 ROS의 저해 효과 564) 제형 내에서 붉나무 열매 추출물의 효능 및 안정성 평가 58(1) 붉나무 열매 추출물의 항산화제 보호 효과 58(2) 붉나무 열매 추출물을 첨가한 에멀전의 안정성 평가 59① pH 측정 결과 59② 점도 측정 결과 60③ Backscattering 측정 결과 62Ⅳ. 결론 64참 고 문 헌 66Abstract 73