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논문 기본 정보

자료유형
학위논문
저자정보

장은빈 (건양대학교, 건양대학교 대학원)

지도교수
이우일
발행연도
2020
저작권
건양대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수10

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

초록· 키워드

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Epidermal growth factor (EGF) is a protein that affects cell growth and proliferation. The gene of human EGF was codon-optimized with E. coli and cloned into pRSET. The recombinant EGF was co-expressed with chaperone proteins in order to get the recominant protein as a active form. The successfully obtained EGF was purified using Ion Exchange Chromatography. ELISA analysis showed that the activity of purified EGF was more than 99% similar to that of commercial EGF. Cell proliferation test confirmed that the recombinant human EGF promotes cell proliferation of human skin fibroblasts. Our expression system of recombinant human EGF gives a significant amount of the protein and does not require a renaturation step and an additional chromatographic system to remove a fusion contaminant, which provides a very useful alternative to conventional expression systems for the preparation of recombinant human EGF.

목차

제1장 서론 01
제2장 이론적 고찰 04
2.1. 유전자 cloning(유전자재조합) 04
2.2. PCR (Polymerase Chain Reaction) 04
2.3. 샤페론 05
제3장 실험 및 방법 09
3.1. 재료 09
3.1.1 시약 09
3.1.2 기기 10
3.2. 실험방법 11
3.2.1. PCR을 통한 human EGF 유전자 증폭 11
3.2.2. 제한효소(Restriction enzyme) 및 Ligation 반응 13
3.2.3. human EGF의 발현벡터 구축 13
3.2.4. Transformation 16
3.2.5. BL21(DE3)로부터 재조합 pEGF의 발현 16
3.2.6. 재조합 pEGF와 샤페론 벡터의 공발현 17
3.2.7. Ion Exchange chromatography를 통한 재조합 hEGF 단백질의 정제 18
3.2.8. 재조합 hEGF의 ELISA assay 18
3.2.9. 재조합 EGF의 Cell proliferation test 19
제4장 결과 및 고찰 20
4.1. PCR을 통한 human EGF 유전자 증폭 확인 20
4.2. BL21(DE3)로부터 재조합 pEGF의 발현 확인 23
4.3. 재조합 pEGF와 샤페론 벡터의 공발현 확인 24
4.4. Ion Exchange chromatography를 통한 재조합 hEGF 단백질의 정제 결과 28
4.5. 재조합 hEGF의 ELISA assay 결과 35
4.6. 재조합 EGF의 Cell proliferation test 결과 39
제5장 결론 41
참고문헌 42
ABSTRACT(국문요약) 52
부록 53
감사의 말씀 58

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