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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 지도교수
- 전태준
- 발행연도
- 2023
- 저작권
- 인하대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
이용수9
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연골, 뼈, 지방으로 분화할 수 있는 다능성 세포인 중간엽 줄기세포(Mesenchymal Stem Cells, MSCs) 는 윤리적인 문제를 발생시키지 않는 줄기세포치료제 중 하나이다. 그 중 지방(Adipose)은 중간엽 줄기세포(MSCs)의 풍부한 공급원이기에 지방 유래 중간엽 줄기세포(Adipose derived Mesenchymal Stem Cells, ADMSCs) 는 다른 공급원들에 비해 세포의 공급이 용이하기 때문에 세포치료제의 임상 적용에 필수적인 세포이다. 하지만 지방유래 중간엽 줄기세포의 생체 외 확장을 위해서 사용되는 혈청(Serum)은 세포의 증식률을 증가시키는 효과가 있지만 혈청의 편차로 인하여 정확한 배양 환경을 정의하기가 어렵다. 뿐만 아니라, 바이러스와 같은 오염의 원인이 될 수 있다. 따라서 혈청 성분을 대체하고, 동물유래 성분들을 감소시키면서 세포의 확장조건을 명확하게 하는 무 혈청 배지를 개발하는 것은 지방유래 중간엽 줄기세포를 임상에 적용하는데 필수적이다.
본 연구는 세포의 생체 외 확장 조건을 최적화하기 위하여 실험계획법을 사용하였다. 실험계획법을 사용하여 24개의 요인 중에서 세포 성장에 유의미한 영향을 주는 요인들을 확인하였고, 선정된 요인들의 농도를 재설정하여 최적화 시켰다. 최적화된 무 혈청 배지에서 진행한 배양은 혈청함유 배지를 이용한 배지와 비교 하였을 때, 73%의 효능을 나타내었다. 또한, 지방유래 중간엽 줄기세포 특이적 표면 마커의 발현 양도 유지하였다.
본 연구는 세포의 생체 외 확장 조건을 최적화하기 위하여 실험계획법을 사용하였다. 실험계획법을 사용하여 24개의 요인 중에서 세포 성장에 유의미한 영향을 주는 요인들을 확인하였고, 선정된 요인들의 농도를 재설정하여 최적화 시켰다. 최적화된 무 혈청 배지에서 진행한 배양은 혈청함유 배지를 이용한 배지와 비교 하였을 때, 73%의 효능을 나타내었다. 또한, 지방유래 중간엽 줄기세포 특이적 표면 마커의 발현 양도 유지하였다.
목차
1. Introduction 11.1. Adipose derived Mesenchymal Stem Cells 11.1.1. surface markers of ADMSCs 21.2. problem of serum in ex vivo expansion 41.3. Design of Experiments(DoE) 51.3.1. Steepest ascents 62. Materials and Methods 82.1. 3steps of Design of Experiments(DoE) DoE 82.1.1. Screening DoE 102.1.2. Characterization DoE 142.1.3. Optimization DoE 172.2. Media preparation 192.3. Cell culture 212.4. MTT assay 212.5. Flow cytometry 223. Result 233.1. Screening DoE 233.2. Characterization DoE 303.2.1. Steepest ascent 363.3. Optimization DoE 383.4. Cell proliferation and morphology 433.5. Flow cytometry 454. Conclusion and Discussion 475. Reference 49
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