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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학술저널
- 저자정보
- 발행연도
- 1999.1
- 수록면
- 1,160 - 1,165 (6page)
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참김(P. tenera)의 total DNA를 Hoechst dye/CsCl 농도구배 초고속 원심분리로 분리하였을 때, 두개의 band가 분리되었다. Hoechst dye는 핵산염기서열중 AT가 풍부한 배열에서만 결합하는 염색시약으로서 상부 band는 세포소기관(엽록체, 미토콘드리아) 핵산 및 plasmid 부분이 염색되고, 하부 band는 chromosome의 핵산을 나타내는 부분이다. 이 plasmid는 엽록체나 미토콘드리아와 함께 분리되었으므로 엽록체나 미토콘드리아 유래의 plasmid일 가능성이 매우 높다. 이 plasmid는 다른 홍조류나 북미산의 김종류보다 핵산분리가 힘들고, 또 DNA의 농축이 어려운 한국산 양식김에서(참김)에서 처음으로 분리된 plasmid DNA이었다. 이 plasmid가 선형(linear) conformation인지 구형(circular) conformation인지 확인하기 위해 0.8% agarose 젤+TBE 완충액과 1.2% agarose 젤+TAE(Tris-acetic acid EDTA)전기영동 완충액으로 따로 전기영동해 본 결과 각각의 전기영동 시스템에서 서로 다른 결과를 가져왔다. 0.8% gel에서는 1.8kb의 marker자리로 그리고, 1.2% gel에서는 2.0kb marker의 자리로 영동되었다. 따라서 이 plasmid는 전기영동 조건에 따라 영동거리가 변화함으로써 linear가 아닌, circular plasmid로 확인되었다. 그리고 소량의 김(0.05g)으로 plasmid을 분리한 결과 상당량의 plasmid를 분리할 수 있었던 것으로 보아 본 plasmid는 high copy plasmid로 추산되었다. 이 plasmid의 제한효소 mapping을 하기 위해 agarose gel의 plasmid band부분을 칼로 절단하여 gel elution을 실시한 후에 선택된 여러 가지 제한효소를 처리하여 본 후 unique한 제한효소을 선택하여 절단 반응시켜 본 결과 EcoRI, SacI, SalI의 처리에서는 2.5kb 정도의 크기로 나타났으며, PstI과 BglI을 혼합 처리한 결과에서는 2.2kb 크기로 판정되었다. 따라서 이 plasmid는 최소 2.5kb이상 크기를 가진 고리형 plasmid라 결론지었다(Fig. 4). 이플라스미드를 이용해서 김형질전환벡터작성이 진행중이다.
목차
Abstract
서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
요약
문헌
참고문헌 (0)
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