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RNA interference(RNAi)는 살아있는 세포 내에서 유전자의 표현 형을 억제하는 작용을 하고 Chitinase는 곤충이 탈피를 하는 동안 오래된 큐티클의 분해와 재흡수를 도와주는 효소로 알려져 있다. 이러한 작용기작을 이용하는 연구를 수행하기 위하여 담배거세미나방의 chitinase와 관련하여 탈피저해 효과를 조사하였다. 담배거세미나방 5령 유충으로부터 RNA를 추출하고 이용하여 cDNA를 합성하고 약 700 bp의 chitinase를 증폭 하였다. 증폭한 PCR product를 pGEM T-easy vector에 cloning하여 competent cell (E.coli)에 형질전환 시키고 mixture를 배양 후 colony를 선발하고 plasmid DNA를 추출하였다. 그 결과 약 3 kb size의 vector band와 약 700 bp의 insert band를 확인 할 수 있었다. dsRNA를 합성하기 위해 각각의 DNA를 Spe I과 Nco I의 제한 효소 처리를 하여 linear form의 DNA로 만들었다. dsRNA 합성 후 약 10 μg/μl의 농도로 5 μl씩 담배거세미나방 4령 유충에 주입하였다. 그 결과 유충-유충간의 탈피에서는 기형발육, 탈피저해, 표피의 색소 변이가 나타났다. 번데기-성충 간의 탈피에서는 탈피저해, 날개변이, 기형발육 현상을 볼 수 있었다. 용화율의 경우 무처리구 83.3%, DW 처리구 78.3%, dsRNA 처리구 66.7%로 나타났다. 우화율의 경우 무처리구 90.0%, DW 처리구 72.3%, dsRNA 처리구 65.0%로 나타나 dsRNA를 처리한 그룹에서 상대적인 탈피 저해 효과를 확인할 수 있었다. 그러나 변이율의 경우 무처리구 8.9%, DW 처리구 2.9%, dsRNA 처리구 19.2%로 dsRNA를 주입한 처리구에서 변이율이 가장 높게 나타난 것을 확인할 수 있었다. 표현형적 변이는 dsRNA 주입 후 약 18 시간 이후부터 뚜렷하게 나타나는 것을 볼 수 있었다.
목차
Abstract
서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
Literature Cited
요약
참고문헌 (24)
참고문헌 신청
1. [학술지(정기간행물)] - Arakane, Y. / 2004 / Characterization of two chitin synthase genes of the red flour beetle, Tribolium castaneum, and alternate exon usage in one of the genes during development / Insect Biochem. Mole. Biol 34 : 291 ~ 304
2. [학술지(정기간행물)] - Bautista, M. A. M. / 2009 / RNA interference-mediated knockdown of a cytochrome P450, CYP6BG1, from the diamonback moth, Plutella xylostella, reduces larval resisitance to permethrin / Insect Biochem. Mole. Biol 39 : 38 ~ 46
3. [학술지(정기간행물)] - Bettencourt, R. / 2002 / Hemolin gene silencing by ds-RNA injected into Cecropia pupae is lethal to next generation embryos / Insect Mole. Biol 11 : 267 ~ 271
4. [학술지(정기간행물)] - Chen, X. / 2008 / Disruption of Spodoptera exigua larval development by silencing chtin synthase gene A with RNA interference, B / Entomol. Res 98 : 613 ~ 619
5. [학술지(정기간행물)] - Coy, M. R. / 2012 / Gene silecing in adult Aedes aegypti mosquitoes through oral delivery of double-stranded RNA / J. Appl. Entomol 136 (10) : 741 ~ 748
2. [학술지(정기간행물)] - Bautista, M. A. M. / 2009 / RNA interference-mediated knockdown of a cytochrome P450, CYP6BG1, from the diamonback moth, Plutella xylostella, reduces larval resisitance to permethrin / Insect Biochem. Mole. Biol 39 : 38 ~ 46
3. [학술지(정기간행물)] - Bettencourt, R. / 2002 / Hemolin gene silencing by ds-RNA injected into Cecropia pupae is lethal to next generation embryos / Insect Mole. Biol 11 : 267 ~ 271
4. [학술지(정기간행물)] - Chen, X. / 2008 / Disruption of Spodoptera exigua larval development by silencing chtin synthase gene A with RNA interference, B / Entomol. Res 98 : 613 ~ 619
5. [학술지(정기간행물)] - Coy, M. R. / 2012 / Gene silecing in adult Aedes aegypti mosquitoes through oral delivery of double-stranded RNA / J. Appl. Entomol 136 (10) : 741 ~ 748
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