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본 연구에서는 zebrafish에 인간의 KCNE1 유전자가 삽입된 형광단백질 vector를 microinjection하고, 그 발현여부를 확인하고자 하였다. 먼저 양 말단에 제한효소(EcoRΙ, BamHΙ) site를 넣어 제작한 primer들로 genomic DNA에서 KCNE1 유전자를 분리하였다. 그 결과는 약 402 bp 크기의 DNA band였고 이 PCR 산물을 형광단백질 vector인 pPB-CMVp-EF1-GreenPuro 속에 클로닝하여 pPB-CMVp-hKCNE1-EF1-GreenPuro plasmid를 제작하였다. 이렇게 준비된 형광 vector를 zebrafish 수정란에 microinjection하였고, 부화된 치어에서 RT-PCR과 DNA sequencing을 통해 GFP 및 hKCNE1의 발현을 최종 확인하였다. 본 연구는 향후 QT 연장증후군(LQTs)에 대한 동물 모델로써 신경자극 전도, 유전자 치료, 유용 유전자 클로닝을 위한 기술 개발에 응용될 수 있을 것으로 기대된다.
목차
서론
재료 및 방법
결과
고찰
감사의 글
References
초록
참고문헌 (22)
참고문헌 신청
Amsterdam, A., Burgess, S., Golling, G., Chen, W., Sun, Z., Townsend, K., Farrington, S., Haldi, M. and Hopkins, N. 1999. A large-scale insertional mutagenesis screen in zebrafish. Genes Dev. 13, 2713-2724.
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Bhimachar, B. S. and Subra Rau, A. 1941. The Fishes of Mysore State. I. fishes of Kadur District. Half-yearly J. 1, 141-153.
Busch-Nentwich, E., Sollner, C., Roehl, H. and Nicolson, T. 2004. The deafness gene dfna5 is crucial for ugdh expression and HA production in the developing ear in zebrafish. Development 131, 943-951.
Cho S. W., Park, H. J., Kim, G. Y., Nam, M. K., Kim, H. Y. Ko, I., Kim, C. H. and Rhim, H. 2006. Establishment of the expression system of human HtrA2 in the zebrafish. J. Life Sci. 16, 571-578.
Bhimachar, B. S. and Subra Rau, A. 1941. The Fishes of Mysore State. I. fishes of Kadur District. Half-yearly J. 1, 141-153.
Busch-Nentwich, E., Sollner, C., Roehl, H. and Nicolson, T. 2004. The deafness gene dfna5 is crucial for ugdh expression and HA production in the developing ear in zebrafish. Development 131, 943-951.
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