GPCR 냉동보관 세포의 활용을 위한 냉동조건의 최적화 연구

노효진; 이승호

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자료유형: 학술저널

저자정보: 노효진 이승호

저널정보: 한국산학기술학회 한국산학기술학회 논문지 한국산학기술학회논문지 제16권 제2호

발행연도: 2015.2

수록면: 1,200 - 1,206 (7page)

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신약 개발의 주요 표적이 되는 G-protein coupled receptor (GPCR)은 대부분의 생리적 활동에 관여하며 다양한 질병 과 질환들에 관련되어 있다. GPCR을 타겟으로 하는 의약개발 연구에서 필수적인 실험방법으로 많이 활용되고 있는 세포기 반 스크리닝 기술들은 사용되는 세포의 상태에 따라 데이터의 질이 좌우되는데 최근, 실험에 사용할 세포를 매번 배양하면서 소모되는 비용과 데이터의 변동을 줄이기 위해 냉동보관 세포를 적용하는 추세이다. 이에 본 연구에서는 단일 세포를 많은 양으로 배양하고 냉동 보관한 다음 사용되는 세포의 반응을 최적화하기 위하여 칼슘 검출을 위한 광 단백질이 포함된 세포주 에 calcium sensing receptor와 urotensin Ⅱ receptor가 안정적으로 발현되는 안정화 세포를 제작하고 ?80°C에서 보관한 다음 7 일 간격으로 실험했을 때 효능제와 길항제 반응을 비교하였다. 실험결과 보관기간이 증가함에 따라 세포 신호 값이 감소하였지만 EC50와 IC50 값의 변화는 나타나지 않았다(EC50:3.46±1.36 mM, IC50:0.49±0.15 μM). 그러나 액체질소에서 보관 한 세포의 경우에서는 비냉동 세포와 비교하여 세포 신호 값이 감소했지만 보존기간에 따른 변화가 나타나지 않았으며 기간 에 따른 EC50와 IC50의 변화도 없었다. 보관기간이 경과 될수록 세포의 신호 값이 감소하는 것은 세포 손상도 증가가 원인인 것으로 판단되며, 이러한 결과들로부터 장기간 냉동 보관을 위해서는 액체질소를 이용하는 것이 가장 효과적이고 한 달 이내 단기간 사용의 목적으로는 ?80°C 보관조건도 가능할 것으로 판단된다. 이와 같이 냉동세포의 적극적인 활용을 통하여 초기 스크리닝 과정에서 나타나는 실험 유동성을 감소시킬 수 있을 것으로 예상된다.

#Frozen cells #G-protein coupled receptor #High-throughput screening #Drug screening

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2. [학술지(정기간행물)] - S. Bhaumik / 2002 / Optical imaging of Renilla luciferase reporter gene expression in living mice / Proceedings of the National Academy of Sciences 99 (1) : 377 ~ 382

3. [학술지(정기간행물)] - W. W. Lorenz / 1991 / Isolation and expression of a cDNA encoding Renilla reniformis luciferase / Proceedings of the National Academy of Sciences 88 (10) : 4438 ~ 4442

4. [학술지(정기간행물)] - Fox, S. / 2004 / High-Throughput Screening: Searching for Higher Productivity / Journal of Biomolecular Screening 9 (4) : 354 ~ 358

5. [학술지(정기간행물)] - Oren E. Beske / 2002 / High-throughput cell analysis using multiplexed array technologies / Drug Discovery Today 7 (18) : S131 ~ S135

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