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p21-activated kinase (PAK)-interacting exchange factor (PIX) is known to be involved in regula-PIX binds to the proline-rich region of PAK, and regulates biological events through activation of Cdc42/Rac GTPase. To further investigate the role of PIX we produced monoclonal antibodies (Mab) against βPIX. Three clones; N-C6 against N-terminal half and C-A3 and C-B7 against C- terminal half of βPIX were generated and char-acterized. N-C6 Mab detected βPIX as a major band in most cell lines. C-A3 Mab recognizes GIT-binding domain (GBD), but it does not in-terfere with GIT binding to βMab posible βPIX interaction with actin in PC12 cels was examined. βPIX Mab (C-A3) specifi-caly precipitated actin of the PC12 cel lysates whereas actin Mab failed to imunoprecpitate βPIX. Co-sedimentation of PC12 cell lysates with the polymerized F-actin resulted in the recovery of most of βPIX in the cell lysates. These results sugest that βPIX may not interact with soluble actin but with polymerized F-actin and revealed that βactin. These data indicate real usefulness of the βPIX Mab in the study of βPIX role(s) in re-gulation of actin cyoskeleton.

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