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Our previous study showed that the overexpressionof carboxypeptidase Y (CPY) of Saccharomyces cerevisiae inEscherichia coli resulted in the formation of insoluble inclusionbodies. To produce soluble CPY, we designed a novel Pichiapastoris expression system, in which the following were insertedinto expression vectors: three different signal sequences derivedfrom the mating factor a1 of S. cerevisiae, an inulinase ofKluyveromyces marxianus, and the endogenous signal sequenceof CPY. The expression vector pHIL-D2-SSinul-proCPY wasthe most effective in the production of proCPY among thevectors examined. The purified active CPY was obtainedfrom proCPY by treating with proteinase K, followed by QExcelloseion-exchange column chromatography.

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