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A one-step real-time quantitative RT-PCR assayin combination with automated RNA extraction was evaluatedfor routine testing of HCV RNA in the laboratory. Specificprimers and probes were developed to detect 302 bp on 5'-UTR of HCV RNA. The assay was able to quantitate adynamic linear range of 107-101 HCV RNA copies/reaction(R2=0.997). The synthetic HCV RNA standard of 1.84±0.1(mean±SD) copies developed in this study corresponded to 1international unit (IU) of WHO International Standard forHCV RNA (96/790 I). The detection limit of the assay was 3RNA copies/reaction (81 IU/ml) in plasma samples. The assaywas comparable to the Amplicor HCV Monitor (Monitor) assaywith correlation coefficient r=0.985, but was more sensitivethan the Monitor assay. The assay could be completed within3 h from RNA extraction to detection and data analysis for upto 32 samples. It allowed rapid RNA extraction, detection, andquantitation of HCV RNA in plasma samples. The methodprovided sufficient sensitivity and reproducibility and provedto be fast and labor-saving, so that it was suitable for highthroughput HCV RNA test.

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