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저널정보
한국축산학회(구 한국동물자원과학회) 한국축산학회지 한국축산학회지 제47권 제3호
발행연도
2005.1
수록면
465 - 474 (10page)

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Semi-nested primer들을 사용하여 그람음성세균을 2 CFU까지 검출할 수 있는 2단계 broad- range PCR을 개발하였다. 첫 번째 PCR에서는 GNF1과 GNR1를 primer로서 사용하였으며 두 번째 PCR에서 GNF2와 GNR1를 semi-nested primer로서 사용하였다. GNF1-GNR1 및 GNF2- GNR1 primer 쌍을 사용한 두개의 1단계 PCR 모두에서 Escherichia coli, Enterobacter aero- genes, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas spp. 및 Acinetobacter baumaii를 포함한 그람음성세균7균주에서 16S rRNA 유전자 절편이 검출되었고 Achromobacter lyticus와 Alcaligens faecalis, 및 그람양성세균 5균주에서는 검출되지 않았다. DNA를 신속하게 추출하는 방법 중에서 가열법으로 Pseudomonas fluorescens의 DNA를 추출한 경우에서 semi-nested primer를 사용한 2단계 PCR에 의해 2CFU까지 검출할 수 있었다. 초고온 순간살균유와 저온장시간 살균유로부터 two-step PCR에 의해 16S rRNA 유전자의 DNA가 검출되었다. 저온장시간 살균유에 P. fluorescens로 첨가한 후에 65℃, 80℃ 100℃에서 30분간 가열한 시료에서 16S rRNA가 검출되었다. 그러나 121℃에서 15분간 autoclave한 시료에는 검출되지 않았다. P. fluorescens를 첨가한 시유를 65℃에서 30분간 가열처리한 시료가 가열처리하지 않은 시료에 비해 DNase 처리에 대해 더 민감하게 DNA가 파괴되어 2단계 PCR에 의해 16S rDNA가 검출되지 않았다.
#PCR #16S rRNA #Gram-negative bacteria #Market milk

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/ 1984 / Bergey’s manual of systematic bacteriology google schola / 1987 / Analysis of DNA extract from formalin-fixed paraffin-embedded tissues by enzy- matice amplification and hybridization with sequence- specific oligonucleotides : 710 google schola / 1987 / Bacterial evolution 51 : 221 ~ 271 google schola / 1988 / Mitochondrial DNA sequences from a 7000-year brain : 0775 ~ 87 google schola / 1988 / Phylogenetic group-specific oligonucleotide probe for identification of single microbial cells giovan (i) : 720 ~ 726 google schola

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