Bacillus pseudomycoides로 부터 분리된 alanine racemase 유전자의 cysteine 치환 및 생화학적 특성

강한철; 윤상홍; 이창묵; 구본성

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자료유형: 학술저널

저자정보: 강한철 (농촌진흥청 국립농업과학원 기능성물질개발과) 윤상홍 (농촌진흥청 국립농업과학원 기능성물질개발과) 이창묵 (농촌진흥청 국립농업과학원 기능성물질개발과) 구본성 (농촌진흥청 국립농업과학원 기능성물질개발과)

저널정보: 한국응용생명화학회 Journal of applied biological chemistry Journal of applied biological chemistry 제53권 제4호

발행연도: 2010.1

수록면: 195 - 201 (7page)

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B. pseudomycoides로 부터 alanine racemase 유전자를 분리한 다음 이 효소에 존재하는 두개의 cysteine을 하나(C316A) 또는 두개 모두(C316-365A) alanine으로 치환시켰다. 치환된 alanine racemamase는 pET-21 운반체에 삽입한 다음 숙주세포로서 E. coli BL21 (DE3)를 이용하여 발현시켰다. 발현된 단백질은 6XHis이 결합된 affinity chromatography를 이용하여 분리하였으며 SDS-PAGE 분석에서 모두 약 46 kDa의 주요 단일밴드를 나타내었다. Cysteine(-) 변이체의 alanine racemase가 모두 활성도를 보여 cysteine이 catalytic 또는 binding sit에 관여하지 않는 것으로 추정되었다. 변이체 효소들은 wild type에 비하여 열 안정성이 모두 떨어져 $60^{\circ}C$ pH 8.0에서의 활성도 반감시간이 각각 26(wild type), 21(C316A) 18분(C316-365A)-을 나타내었다. 이러한 결과는 cysteine이 열안정화에 상당히 기여함을 알 수 있었다. 그러나 pH 변화에 대한 안정성은 큰 차이가 없었다.

#alanine racemase #Bacillus pseudomycoides #cysteine #-) mutant

참고문헌 (28)

참고문헌 신청

Bradford MM / 1976 / A rapid sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding / Anal Biochem 72:248~254

Bonaccorsi DP / 2000 / A free cysteine residue at the dimer interface decreases conformational stability of Xenopus laevis copper, zinc superoxide dismutase / Arch Biochem Biophys 377:284~289

Burova TV / 1998 / Role of free Cys121 in stabilization of bovine betalactoglobulin B / Protein eng 11:1065~1073

Fremaux I / 2002 / Improvement of Drosophila acetylcholinesterase stability by elimination of a free cysteine / BMC Biochem 3:21~27

Gloss LM / 1992 / Contribution to catalysis and stability of the five cysteines in Escherichia coli aspartate aminotransferase: preparation and properties of a cysteine-free enzyme / Biochemi 31:32~39

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