전통주 주박의 추출물 및 분획물에 의한 항염증 활성 연구 :Suppressive Effects of Extracts and Solvent Fractions of Rice Wine Lees on Inflammation in RAW 264.7 cells

박미정

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자료유형: 학위논문

저자정보: 박미정 (안동대학교, 안동대학교 대학원)

지도교수: 김종식

발행연도: 2014

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

2014

주박 추출물과 이들의 유기용매 분획물에 의한 항염증 활성

박미정 , 강형택 , 김미선 외 3명 생명과학회지 2014.08 학술저널

전통주 주박의 추출물 및 분획물에 의한 항염증 활성 연구

박미정 생물학과 2014.01 학위논문

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In the current study, we prepared eighty-five different kinds of solvent fractions of rice wine lees extracts and investigated their effects on cell viability and NO production in mouse RAW 264.7 cells. Among treated solvent fractions, three solvent fractions (KSD-E1-3, KSD-E2-3 and KSD-E4-3) significantly decreased NO production in LPS-activated RAW 264.7 cells without affecting cell viability. And also, they reduced the expression of pro-inflammatory genes such as COX-2, TNF-alpha and iNOS. To understand the molecular mechanisms involved in the inhibition of inflammatory activity in (KSD-E4-3)-treated RAW 264.7 cells, we carried out oligo DNA microarray analysis using Agilent Mouse GE 4 X 44K (V2) microarray. To confirm microarray data, we selected 8 genes (Cxcl10, IL-1A, CSF2, IL-1RN, IL-10, iNOS, Fabp4, and IL-1F6) performed RT-PCR and quantitative real-time PCR using gene specific primers. The result of RT-PCR agreed with microarray data. Overall, our results suggest that rice wine lees can be a novel resource for the development of foods and drugs which possess anti-inflammatory activity.

Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 재료 및 방법 5
1. 실험재료 5
2. 실험방법 5
1) 주박 추출물 및 분획물의 제조 5
2) 동물세포배양 8
3) 1차 주박 추출물 및 분획물의 생리활성 연구 8
(1) Nitric oxide assay (Griess reagent assay) 8
(2) Cell viability assay (MTS assay) 9
(3) Total RNA 추출 9
(4) Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) 10
4) 2차 주박 추출물 및 분획물의 생리활성 연구 13
(1) Nitric oxide assay (Griess reagent assay) 13
(2) Cell viability assay (MTS assay) 13
(3) Total RNA 추출 13
(4) Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) 14
5) Oligo DNA microarray 실험 14
6) Polymerase chain reaction 15
7) Quantitative real-time PCR 17
Ⅲ. 결론 및 고찰 19
1. RAW 264.7 세포주에서 1차 40종류 주박 추출물 및 분획물에 의한 nitric oxide (NO) 생성과 세포생존율 측정 19
2. 선별된 5종류의 주박 추출물 및 분획물의 농도별 처리에 따른 nitric oxide (NO) 생성과 세포생존율 측정 21
3. 선별된 5종류의 주박 추출물 및 분획물에 의한 iNOS, TNF-alpha, COX-2 유전자의 발현 연구 23
4. RAW 264.7 세포주에서 2차 45종류 주박 추출물 및 분획물에 의한 nitric oxide (NO) 생성과 세포생존율 측정 25
5. 선별된 3종류의 주박 추출물 및 분획물의 농도별 처리에 따른 nitric oxide (NO) 생성과 세포생존율 측정 27
6. 선별된 3종류의 주박 추출물 및 분획물에 의한 iNOS, TNF-alpha, COX-2 유전자의 발현 연구 29
7. Oligo DNA microarray를 이용한 유전체 전체 수준에서의 유전자 발현 연구 30
8. RT-PCR과 정량적 real-time PCR을 통한 oligo DNA micro-array 실험 결과 검증 34
Ⅳ. 요약 38
Ⅴ. 참고문헌 41
Ⅵ. 영문초록 47

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