연구목적 : 고지방 식이 C57BL/6N 마우스 모델을 이용하여 降脂丸(DF)의 투여가 비알코올성지방간질환(NAFLD)을 개선하는지를 조사하였다.

연구방법 : DF는 3종류 약재(麻黃, 大黃, 紫草)를 용매분획하여 준비하였으며, 수컷 C57BL/6N 마우스를 사용하였다. 일반 식이 마우스를 정상군으로, 고지방식이 유도 비만 마우스는 4개군으로 나누어 사용하였다: 대조군, DF-FW, DF-GA30과 DF-GA70. 8주간 약물을 투여한 후 체중증가량, 비알코올성지방간질환 관련 혈액지표, 간무게 및 지방무게, 간세포 및 지방세포의 조직학과 형태학적 변화와 in vivo 및 in vitro에서의 분자생물학적 분석을 조사하였다.

연구결과 : 1. DF-FW와 DF-GA70은 대조군에 비하여 통계적으로 유의하게 체중증가량이 감소하였으며, 식이효율은 약물처리군 모두에서 대조군에 비하여 통계적으로 유의하게 감소하였으며, 그 효과는 DF-GA70에서 더욱 현저하였다.
2. ALT, glucose와 leptin의 농도는 대조군에 비하여 약물처리군 모두에서 통계적으로 유의하게 감소하였으며, total cholesterol과 LDL-cholesterol의 농도는 대조군에 비하여 DF-GA30과 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 감소하였고, triglycerides, free fatty acids와 insulin의 농도는 DF-GA70에서 대조군에 비하여 통계적으로 유의하게 감소하였다.
3. 간장의 무게는 대조군에 비해 모든 약물처리군에서 감소하였으며, DF-FW와 DF-GA70에서 통계적인 유의성이 있는 것으로 나타났다.
4. 간세포의 지방축적은 대조군에 비하여 약물처리군의 모두에서 통계적으로 유의하게 감소하였으며, 간세포의 섬유화는 대조군에 비하여 약물처리군의 모두에서 감소하였다.
5. 지방조직의 무게의 경우 DF-FW는 대조군에 비하여 mesenteric adipose tissue와 brown adipose tissue의 무게가 통계적으로 유의하게 낮았으며(P<0.01), DF-GA30은 대조군에 비하여 mesenteric adipose tissue를 제외한 모든 지방조직의 무게가 유의하게 낮았으며, DF-GA70의 경우 모든 지방조직의 무게가 유의하게 낮았다. Epididymal adipose tissue의 지방세포 크기는 대조군에 비하여 DF-GA30과 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 감소하였으며, 단위면적당 세포수는 대조군에 비하여 증가하였다. Inguinal adipose tissue의 지방세포 크기는 대조군에 비하여 약물처리군의 모두에서 통계적으로 유의하게 감소하였으며, 단위면적당 세포수는 대조군에 비하여 증가하였다.
6. 간조직의 in vivo 분자생물학적 연구에서, ACOX와 thiolase mRNA 발현은 대조군에 비하여 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 증가하였으며, CPT-1과 VLCAD mRNA 발현은 대조군에 비하여 DF-GA30과 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 증가하였다. 지방생성 유전자인 FAS와 SCD1 mRNA의 경우 대조군에 비하여 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 감소하였으며, SREBP1c mRNA의 경우 DF-GA30과 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 감소하였고, C/EBPα mRNA의 경우 DF-FW에서 통계적으로 유의하게 감소하였다. 염증인자인 VCAM-1 mRNA 발현은 대조군에 비하여 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 감소하였으며, 섬유화인자인 α-SMA mRNA 발현은 DF-GA30과 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 감소하였다. 세포사멸 유전자인 caspase 3 mRNA의 경우DF-GA30과 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 감소하였으며, 세포사멸 억제 유전자인 Bcl-2 mRNA의 경우 DF-FW와 DF-GA70에서 통계적으로 유의하게 증가하였다.
7. 3T3-L1 지방세포의 in vitro 분자생물학적 연구에서, DF-GA70을 농도별로 처리하였을 때 세포질의 지방과립 축적이 농도의존적으로 억제되었다. PPARγ, C/EBPα, SREBP1c, LPL, FAS, FABP4의 mRNA 발현이 농도의존적으로 감소하였으며, PPARγ, C/EBPα, FABP4, SREBP1c의 단백질 수준이 농도의존적으로 억제되었고 10 ㎍/㎖ 농도부터 뚜렷한 억제를 보였다. Cell viability는 20 ㎍/㎖ 미만의 농도에서는 영향이 없었다. DF-GA70을 10 ㎍/㎖의 농도로 처리하였을 때, 3T3-L1 세포 지방과립의 축적이 거의 억제되었으며, SREBP1c, C/EBPα, PPARγ, LPL, FAS, FABP4의 mRNA 발현이 모두 통계적으로 유의하게 감소하였으며, PPARγ, C/EBPα, FABP4, SREBP1c의 단백질 수준도 억제되었다. 억제효과는 분화유도 4일째에 가장 뚜렷하였으며, 7일째에도 억제효과가 있었다. Cell viability는 2,4,7 일의 분화과정에서 억제가 나타나지 않았다.

결론 : DF는 체중증가량과 식이효율을 감소시키고 혈중 지질대사, 당대사 수치와 ALT 농도를 개선하며 지방조직의 지방축적 및 분화를 줄인다. 또한 간의 지방산화효소의 발현을 증가시키고, 지방생성 인자, 염증성 인자와 섬유화 인자의 발현을 감소시킨다. 이에 따라 간의 무게와 간세포의 지방 축적을 줄이고 간섬유화를 줄임으로써 NAFLD의 개선에 기여할 수 있을 것으로 생각된다. 지방세포주에 용매별 DF 중 70% 에탄올로 추출한 DF를 적정 농도로 투여하였을 때 cell viability에 전혀 영향을 주지 않으면서 그 효과가 증대되는 것으로 보인다.