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논문 기본 정보

자료유형
학위논문
저자정보

이소연 (목원대학교, 목원대학교 대학원)

지도교수
양재찬
발행연도
2017
저작권
목원대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수39

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이 논문의 연구 히스토리 (3)

초록· 키워드

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잘피는 해안 연안에 서식하는 해초로 뿌리로 영양분을 흡수하고 꽃을 피우는 해양 현화 식물이며 뿌리, 지하경, 잎과 꽃으로 구분이 명확하여 해조류와 구분된다. 군락을 이루어 해수에 산소를 공급하는 잘피는 바다 어자원 증가에 크게 도움을 주기 때문에 바다의 건강지표로 알려져 있다. 때문에 연안 생태계를 구성하는 중요한 자원으로서 전 세계적으로 가치가 상승하고 있는 해양자원이다. 잘피에 대한 연구로는 항산화 효능과 항염증, 미백 효능이 있다고 알려져 있으며 잘피의 지표물질로 알려진 luteolin 또한 항산화, 항염증, 미백, 항암 등 다양한 효능이 보고된바 있으나 주로 식품 분야에 국한하여 연구가 이루어져 왔으며 화장품과 피부장벽 개선에 대한 소재로서의 연구는 현재 부족한 실정이다. 본 연구에서는 잘피를 화장품 소재로 활용하기 위해 자외선에 대한 보호효과와 항염증, 항산화, 피부장벽에 영향을 미치는 filaggrin 단백질 발현, 항균 효과를 검증하였으며, 실험동물모델인 Zebrafish를 이용하여 피부재생효과, 미백 효과를 확인하였다. 또한 잘피 추출물을 에멀션에 적용하였을 때 제형에 미치는 영향을 평가하여 기능성화장품 소재로서의 가능성을 확인하였고 사람의 피부에 미치는 보습효과와 안전성 여부 또한 확인하였다. 그 결과, HPLC/UV를 이용하여 70% 에탄올에서 추출한 잘피 추출물에서 잘피의 지표물질로 알려진 luteolin이 함유되어 있음을 확인하였다. 각질 형성세포인 HaCaT 세포와 멜라노마 세포인 B16F10 세포에서 추출물에 대한 독성 실험을 진행한 결과 높은 생존율을 보여 두 세포주 에서 부위별 잘피 추출물의 독성은 낮은 걸로 확인되었으며 HaCaT에서 UV-B에 대한 보호효과를 알아보기 위해 UV-B와 잘피 부위별 추출물을 처리한 실험 결과 처리한 모든 시료에서 80%이상의 세포들이 보호됨을 확인하였다. 또한 세포에 UV-B와 LPS로 염증을 유발하여 잘피 추출물을 처리했을 때 염증 유발인자인 COX-2와 PGE2 의 발현이 감소되는 것을 확인하여 염증으로부터 세포를 보호 할 수 있는 것으로 확인되었다. 피부장벽 기능 조절인자인 filaggrin 단백질 발현을 확인한 결과 잘피 전체 추출물을 처리한 군에서는 시료를 처리하지 않은 세포보다 filaggrin 발현이 증가하였음을 확인할 수 있었으며 이와 같은 결과는 잘피 추출물이 피부장벽을 유지하는데 도움을 줄 수 있을 것으로 판단된다. 항산화 효능을 확인해본 결과 잘피 전체, 뿌리, 잎줄기 추출물 모두 유리된 전자를 효과적으로 제거함을 확인할 수 있었고 SOD 유사 활성에서 또한 모든 시료에서 높은 값을 나타내었으며 세 부위 추출물 중 잘피 전체 추출물에서 가장 높은 항산화 효능을 확인하였다. 또한 잘피의 항균 효능을 확인한 결과 잘피 뿌리 추출물이 S. aureus, S. epidermidis, P. aeruginosa, P. acne 균주를 저해 한다는 결과를 얻었다.
동물모델인 zebrafish를 이용하여 잘피 추출물의 독성을 확인한 결과 embryo에 대한 응고율은 최대 6.67%를 넘지 않는 수준이었으며 시료처리 후 부화지연이 발생하지 않아 embryo에 대한 독성은 세 가지 추출물 모두 낮은 것으로 확인되었다. 또한 larvae의 심장에 미치는 잘피 추출물의 영향 역시 미미함을 확인하였다. larvae를 이용하여 잘피 전체 추출물의 상처 재생 효과와 미백 효능을 확인한 결과 1.00, 0.50 ㎎/㎖농도에서 음성 대조군과 비교했을 때 재생 효과가 있는 것으로 확인 되었으며 잘피 뿌리 부분에서 멜라닌 생합성을 저해한다는 결과를 얻을 수 있었다.
위와 같은 결과를 바탕으로 한 잘피 추출물을 화장품 제형에 적용하여 안정성 시험을 진행한 결과 pH, 점도, turbiscan LAB을 이용한 입자 변화 관찰 시 기간에 따른 변화가 control 에멀션과 비슷한 변화 양상을 나타내었으나 화장품 제형에 적용 시 농도 조절에 유의해야 한다는 사실을 알 수 있었다.
잘피 추출물을 화장품 제형에 적용하여 피부보습효능을 확인한 결과 control 에멀션과 비교했을 때 약 2.6% 더 높은 보습 효과를 보였으며 안정성 결과에서는 어떠한 자극이 발견되지 않아 잘피 추출물을 함유한 크림은 피부에 보습효능을 부여하며 또한 안전하다는 사실을 확인할 수 있었다.
위와 같은 결론을 통해 잘피 추출물은 외부유해환경과 산화적 스트레스로 부터 피부를 보호 하고 상처 치유효과와 보습효과를 부여하며 피부장벽의 기능을 긍정적으로 조절하여 피부질환을 예방하는 화장품 소재로서 활용 가능성을 확인하였다. 또한 피부에 자극이 없기 때문에 다양한 화장품 소재로서 활용이 가능할 것으로 사료된다. 더불어 미백효능 및 항균 효과가 있는 잘피의 부분적인 활용 또한 가능할 것으로 사료된다.

목차

Ⅰ. 서 론 1
Ⅱ. 재료 및 방법 9
1. 실험 재료 9
2. 실험 방법 12
1) 잘피 추출물 제조 12
2) 잘피 추출물 정성분석 12
3) in vitro 수준에서 잘피 추출물의 효능 평가 13
(1) 잘피 추출물의 세포 독성 평가 13
① 세포 배양 13
② 세포생존율 평가 13
(2) UV-B로 손상을 유도한 각질형성세포의 생존율 측정 14
(3) 세포염증을 유발한 세포손상 억제 효과 15
① 염증매개 단백질 발현 측정 : Western blot analysis 15
② Prostaglandin E2(PGE2) level 측정 16
(4) Filaggrin 단백질 발현 평가 17
(5) 잘피 추출물의 항산화 효능 평가 18
① DPPH radical scavenging activity assay 18
② SOD-like activity 18
(6) 잘피 추출물의 항균 효능 평가 19
① 균주 배양 19
② 미생물 생육저해환(clear zone) 측정 20
4) in vivo Zebrafish(Danio rerio)동물모델에서 효능 평가 21
(1) Zebrafish사육 및 embryo생산 22
(2) 잘피 추출물의 독성 평가 23
(3) Zebrafish를 이용한 상처 재생 효능 평가 24
(4) Zebrafish 멜라닌 저해 효과 26
5) 잘피 추출물을 첨가한 에멀션 안정성 평가 27
(1) 잘피 추출물을 함유한 에멀션 제조 27
(2) pH 측정 29
(3) 점도 측정 29
(4) 터비스캔 평가 29
6) 피부보습측정장비를 이용한 잘피추출물 적용 에멀션의 보습평가 30
7) 피부 안전성 평가 31
8) 통계 처리 33
Ⅲ. 결과 및 고찰 34
1. 잘피 추출물 정성분석 결과 34
2. in vitro 수준에서 잘피 추출물의 효능 평가 결과 35
1) 잘피 추출물의 세포 생존율 35
(1) HaCaT 세포 생존율 35
(2) B16F10 세포 생존율 37
2) UV-B로 손상을 유도한 각질형성세포의 보호효과 39
3) 세포염증을 유발한 세포손상 억제 효과 41
(1) UVB로 세포염증을 유도한 HaCaT 세포에서 보호 효과 41
(2) LPS로 세포염증을 유도한 RAW 267.7 세포에서 보호 효과 43
4) 피부장벽 기능 조절 인자 filaggrin 단백질 발현 평가 44
5) 잘피 추출물의 항산화 효능 46
(1) DPPH radical scavenging activity assay에 의한 항산화 활성 46
(2) SOD-like activity에 의한 항산화 활성 48
6) 잘피 추출물의 항균 효능 50
3. in vivo Zebrafish(Danio rerio)동물모델에서 효능 평가 결과 55
1) 잘피 추출물의 독성 평가 결과 55
(1) 잘피 부위별 추출물의 Zebrafish Embryo에서의 발생독성 결과 55
(2) 잘피 부위별 추출물의 Zebrafish Larvae에서의 부정맥 측정 결과 60
2) Zebrafish를 이용한 잘피의 상처 재생 효과 62
3) Zebrafish 멜라닌 저해 활성 65
4. 잘피 추출물을 첨가한 에멀션 안정성 평가 결과 68
1) pH 변화 관찰 68
2) 점도 변화 관찰 70
3) 에멀션 입자 안정성 변화 관찰 72
5. 피부보습측정장비를 이용한 잘피추출물 적용 에멀션의 보습 효능 76
6. 피부 안전성 평가 결과 78
Ⅳ. 결론 79
참 고 문 헌 82
Abstract 89

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