Diagnostic Utility of Multiplex Real Time-Polymerase Chain Reaction for Simultaneous Detection of Mycobacterium tuberculosis, Multidrug-resistant Tuberculosis and Extensively Drug-resistant Tuberculosis :결핵균 및 다제내성결핵, 광범위내성결핵까지 동시에 진단할 수 있는 실시간다중 중합효소연쇄반응의 진단적 유용성

김민진

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자료유형: 학위논문

저자정보: 김민진 (경희대학교, 경희대학교 대학원)

지도교수: 이우인

발행연도: 2016

저작권: 경희대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수1

이 논문의 연구 히스토리 (4)

2016

Diagnostic Utility of Multiplex Real Time-Polymerase Chain Reaction for Simultaneous Detection of Mycobacterium tuberculosis, Multidrug-resistant Tuberculosis and Extensively Drug-resistant Tuberculosis

김민진 의학과 2016.01 학위논문

2013

Diagnostic Utility of Multiplex Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction in Hematologic Malignancies

김민진 의학과 2013.01 학위논문

The Utility of the Multiplex Reverse Transcriptase- Polymerase Chain Reaction Assay in the Detection of Hematologic Malignancies

김민진 , 조선영 , 박태성 외 2명 Annals of Laboratory Medicine 2013.01 학술저널

2011

Letter to the Editor: Diagnostic Standardization of Leukemia Fusion Gene Detection System using Multiplex Reverse Transcriptase-polymerase Chain Reaction in Korea

김민진 , 최종락 , 서진태 외 3명 Journal of Korean Medical Science 2011.01 학술저널

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배경

최근 국내에서 개발된 Anyplex™ II MTB/MDR/XDR 는 실시간다중 중합효소연쇄반응을 이용하여 결핵과 다제내성결핵, 광범위내성결핵을 동시에 검출하는 검사법이다. 본 연구에서는 호흡기 검체에서 분리된 결핵균주를 대상으로 실시간다중 중합효소연쇄반응을 이용하여 이를 전통적인 약제감수성검사법인 절대농도법 결과와 비교, 평가하여 진단적 유용성을
설명하고자 한다.

대상과 방법

2009년 2월부터 2013년 5월 사이에 씨젠의료재단에서 결핵균으로 동정된 균주 중 결핵, 다제내성결핵과 광범위내성결핵으로 진단된 262균주를 대상으로 하였다. Anyplex™ II MTB/MDR/XDR (Seegene, Seoul, Korea) 를 이용하여
약제내성과 관련 있는 25개의 다제내성결핵 약제돌연변이 및 13개의 광범위내성결핵 약제돌연변이를 신속하게 검사하여 절대농도법을 이용한 항결핵제 감수성 검사 결과와의 비교하였다. 두 방법 중 항결핵제 감수성 검사 결과를 표준검사법으로 두고 비교하였으며, 두 방법 상 불일치한 결과가 나올 경우 염기서열분석을 통해 확인하였다.

결과

전체 262균주에 대한 실시간다중 중합효소연쇄반응의 내성검출민감도는 이소니아지드에서는 각각 92.9%, 리팜핀에 대해서는 98.4%, 퀴놀론제에 대해서는 89.1%, 카나마이신에 대해서는 79.4%, 아미카신에서는 88.5%, 카프레오마이신에서는 79.3%였다. 내성검출특이도는 모든 약제에서 100%였다. 두 방법간 검사일치도는 이소니아지드에서 96.2%, 리팜핀에서 99.2%, 퀴놀론제에서 98.1%, 카나마이신에서 97.3%, 아미카신에서 98.9%, 그리고 카프레오마이신에서 97.7%였다.

결론

본 연구는 실시간다중 중합효소연쇄반응이 정확하고 빠르게 결핵을 진단하는 동시에 약제내성에 연관된 변화를 3시간 이내에 검사할 수 있다는 장점을 설명하고 있다. 따라서 본 검사를 사용하였을 경우 결핵환자의 진단과 빠른 치료가 가능하도록 도와줄 수 있다고 보여진다. 특히 내성이 의심되는 결핵환자의 경우, 이 새로운 검사법이 좋은 진단도구로 사용될 것이라
생각한다.

Introduction

Seegene Anyplex II MTB/MDR/XDR Detection is a recently developed multiplex real time-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay in South Korea that can simultaneously detect Mycobacterium tuberculosis (MTB), multi-drug resistance TB (MDR-TB), and extensively drug-resistant TB (XDR-TB). In order to address its diagnostic utility, the author compared results derived from multiplex real time PCR with those from the traditional drug-susceptibility test (DST) by analyzing tuberculosis strains separated from respiratory samples.

Materials and Methods

A total of 262 strain samples diagnosed as MTB, MDR and XDR were selected from TB cultures isolated by Seegene Medical Foundation between February 2009 and May 2013. Multiplex RT-PCR using Anyplex™ II MTB/MDR/XDR Detection were quickly identified 25 mutations for MDR and 13 mutations for XDR. The
results were subsequently compared with those from anti-tuberculosis DST using the absolute concentration method. Using the DST results as a reference standard, any inconguent results between the two methods were further confirmed via sequence analysis.

Result

Out of the total 262 strain samples, the detection sensitivity for drug resistance of the multiplex RT-PCR results was 92.9% in isoniazid (INH), 98.4% in rifampin (RFP), 89.1% in fluoroquinolones (FQs), 79.4% in kanamycin (KM), 88.5% in amikacin (AMK), and 79.3% in capreomycin (CPM). Detection specificity was 100% in all drugs. When the multiplex RT-PCR results were compared with those from DST using the absolute concentration method, the two method agreed at 96.2% of the time in INH, 99.2% in RFP, 98.1% in FQs, 97.3% in KM, 98.9% in AMK, and 97.7% in CAP.

Discussion

This study suggests that multiplex RT-PCR can precisely and quickly perform simultaneous testing for TB and drug-resistance related variations within 3 hours and therefore contribute towards providing timely treatment. Especially for highly suspected cases, this new assay can be recommended as a useful MDR-TB diagnosis method.

#시간다중 중합효소연쇄반응 #다제내성결핵 #광범위내성결핵 #약제내성

1. Introduction 1
2. Materials and Methods 4
1)Subject
2) Multiplex RT-PCR using Anyplex II MTB/MDR/XDR Detection assay
3) Antituberculosis drug susceptibility testing
4) Additional analyses for discrepant DST results between Multiplex RT-PCR using Anyplex II MTB/MDR/XDR
Detection assay and absolute concentration method
3. Results 17
1) Multiplex RT-PCR using Anyplex II MTB/MDR/XDR Detection assay result and DST resistance results
2) Sequencing result for discrepant DST results
4. Discussion 25
5. References 31
6. Abstract 37
7. Korean abstract 39

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