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저자정보
저널정보
한국식품영양과학회 한국식품영양과학회지 한국식품영양과학회지 제27권 제6호
발행연도
1999.1
수록면
1,152 - 1,159 (8page)

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Biotin 즉 비타민 H를 신속하고 간편하게 분석하기 위하여 효소 면역측정법(enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA)에 의한 분석방법을 확립하고자 하였다. Keyhole limpet hemocyanin(KLH)을 carrier protein으로 한 biotin-KLH conjugate를 제조하여 Freund's adjuvant와 유탁액을 만든 후 토끼에 면역하여 항biotin 항혈청을 얻었다. 이 항혈청은 인체내에서 유일하게 biotin의 활성을 갖는 biocytin에 대하여 177%의 교차반응율(50% 결합저해농도: IC_(50)=12.58ppb)을 보였으며 desthiobiotin 및 diamminobiotin, 2-iminobiotin 등의 다른 유도체에서는 교차반응이 일어나지 않아 특이성이 높은 것으로 나타났다. 이 항혈청을 protein A column과 Sephadex G-25 column으로 정제하여 항체기가 높은 항biotin 항체를 얻었다. 이 항체를 이용하여 직접법에 의한 경합적 ELISA(competitive direct ELISA; cdELISA)로 biotin을 분석하기 위한 조건을 확립하였다. Biotin의 검출범위는 0.01~300ng/ml(ppb)로 비교적 넓은 범위의 농도를 측정할 수 있었으며 검출감도도 0.01ng/ml로 매우 높게 나타났다. ELISA의 분석결과를 미생물 분석법(microbiological assay; MBA)과 비교하기 위하여 시유와 과일 플레이크 그리고 당근-파인애플 쥬스에 대하여 spike test를 한 결과, 두 방법간의 상관관계가 r=0.992로 매우 높게 나타났다. 그러나 기존의 분석방법인 미생물 분석법에서의 검출범위는 0.1~0.5ng/ml(ppb)로 분석범위가 매우 제한되어 있었고 검출감도도 0.1ng/ml로 비교적 낮았다. 또한 biocytin외에 desthiobiotin과 같이 biotin 활성이 없는 유도체에 대해서도 66.7%의 교차반응을 나타냈다. 그러므로 EL-ISA에 의하여 biotin을 분석하는 것이 기존의 미생물 분석법에 비하여 검출 감도나 검출 범위, 교차반응 등의 여러 가지면에서 우수할 뿐만 아니라 분석방법이 간편하고 신속하며 다량의 시료를 동시에 분석할 수 있기 때문에 식품시료의 분석에는 특히 유용하게 활용될 수 있을 것으로 생각된다.

목차

Abstract

서론

재료 및 방법

결과 및 고찰

요약

감사의 글

문헌

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UCI(KEPA) : I410-ECN-0101-2009-511-018107792