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경제적으로 중요한 식용작물인 콩(Glycine max)의 초기형 질전환 효율증대를 위하여 연구를 수행하였다. 높은 초기형 질전환 조건 확립을 위하여 기초실험으로 Agrobacterium 감염에 순응적인 국내 콩 품종을 스크린 하였으며, 적정한 agar 농도와 선발항생제 hygromycin 농도 규명, 상처방법, explant의 치상방향, 호르몬 전처리, 액체배지 선발 등 형질전환 초기효율에 미치는 영향을 transient GUS 분석을 통하여 알아보았다.
Agrobacterium 감염에 순응적인 품종을 선발하기 위하여 32개의 국내 콩 장려품종을 스크린한 결과, 일품검정콩, 은하콩, 만리콩, 대원콩 등 14개의 순응형 품종을 선발하였으며, 효율적인 제균제로는 cefotaxime이, 효율적인 선발항생제로서는 hygromycin이 선택되었다. Hygromycin 농도는 10-15 ppm이 효율적이었고, agar 농도 0.6-0.8%, explant의 치상방향은 향배축(adaxial side)을 down하여 치상하였을 때가 높은 GUS ( β-glucuronidase)발현빈도를 나타냈고 상처방법은 scalpel보다 동양침을 사용하였을 때 높게 나타났다. 형질전환 체계확립을 위하여 호르몬 전처리를 한 결과, BA 5 ppm과 10 ppm을 처리하였을 때 후기 선발에서 높은 생존율을 보였고, 전처리 후에 액체배지에서 선발을 하였을 때 비형질 전환체(escape)의 빈도를 크게 낮출 수 있었다. 또한 여러 조건의 결과를 비교하여 볼 때, 국내 콩 품종 중에서 형질전환을 위한 재료로써는 은하콩이 가장 적합한 것으로 생각된다.
Agrobacterium 감염에 순응적인 품종을 선발하기 위하여 32개의 국내 콩 장려품종을 스크린한 결과, 일품검정콩, 은하콩, 만리콩, 대원콩 등 14개의 순응형 품종을 선발하였으며, 효율적인 제균제로는 cefotaxime이, 효율적인 선발항생제로서는 hygromycin이 선택되었다. Hygromycin 농도는 10-15 ppm이 효율적이었고, agar 농도 0.6-0.8%, explant의 치상방향은 향배축(adaxial side)을 down하여 치상하였을 때가 높은 GUS ( β-glucuronidase)발현빈도를 나타냈고 상처방법은 scalpel보다 동양침을 사용하였을 때 높게 나타났다. 형질전환 체계확립을 위하여 호르몬 전처리를 한 결과, BA 5 ppm과 10 ppm을 처리하였을 때 후기 선발에서 높은 생존율을 보였고, 전처리 후에 액체배지에서 선발을 하였을 때 비형질 전환체(escape)의 빈도를 크게 낮출 수 있었다. 또한 여러 조건의 결과를 비교하여 볼 때, 국내 콩 품종 중에서 형질전환을 위한 재료로써는 은하콩이 가장 적합한 것으로 생각된다.
목차
영어 초록
재료 및 방법
결과 및 고찰
요약
감사의 글
참고문헌
참고문헌 (12)
참고문헌 신청
Bolton, G. W., E. W. Nester and M. P. Gordon. 1986. Plant phenolic compounds induce expression of the Agrobacterium tumefaciens loci needed for virulence. Science 232, 983-985.
Finer, J. J. and M. D. McMullen. 1991. Transformation of soybean via particle bombardment of embryogenic suspension culture tissue. In Vitro Cell Dev. Biol. 27P, 115-182.
Hinchee, M. A. W.., D. W. Connor-Ward, C. A. Newell, R. E. McDonnell, S. J. Sato, C. S. Gasser, D. A. Fischhoff, D. B. Re, R. T. Fraley and R. B. Horsch. 1988. Production of transgenic soybean plants using Agrobacterium-mediated gene transfer. Bio/Technol
McCabe, D. E., W. F. Swain, B. J. Martinell and P. Christou. 1988. Stable transformation of soybean(Glycine max) by particle acceleration. Bio/Technology 6, 923-926.
Olhoft, P. M., L. E. Flagel, C. M. Donovan and D. A. Somers. 2003. Efficient soybean transformation using hygromycin B selection in the cotyledonary node method. Planta 216, 723-735.
Finer, J. J. and M. D. McMullen. 1991. Transformation of soybean via particle bombardment of embryogenic suspension culture tissue. In Vitro Cell Dev. Biol. 27P, 115-182.
Hinchee, M. A. W.., D. W. Connor-Ward, C. A. Newell, R. E. McDonnell, S. J. Sato, C. S. Gasser, D. A. Fischhoff, D. B. Re, R. T. Fraley and R. B. Horsch. 1988. Production of transgenic soybean plants using Agrobacterium-mediated gene transfer. Bio/Technol
McCabe, D. E., W. F. Swain, B. J. Martinell and P. Christou. 1988. Stable transformation of soybean(Glycine max) by particle acceleration. Bio/Technology 6, 923-926.
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