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당 분해효소의 family 32 (GH32)에 속하는 β-fructofuranosidase는 3차구조를 근거로 볼 때 W(L/M)(C/N) DP(Q/N), FRDPK, 그리고 ECP(D/G) 부위를 포함하는 세 군데의 보전적인 영역을 가지고 있다. 이러한 β-fructofuranosidase family에 속하는 Microbacterium sp. AL-210 유래 levan fructotransferase (LFTase)의 보전적인 산성 아미노산들의 역할이 특정위치 돌연변이법으로 검사되었다. 각각의 돌연변이체는 대장균인 E. coli BL21(DE3)균주에서 발현되어 대량 생산되었고, 금속 친화 크로마토그래피법과 FPLC법으로 순수 정제되었다. wild-type LFTase의 효소의 활성은 0.74 unit 인 반면 네 개의 돌연변이체인 D63A, D195N, E245A, E245D 각각은 specific activity를 측정해 본 결과 원 균주와 비교해서 약 100배 정도 감소한 효소활성을 보여 주었다. 이로써 아미노산 변형의 target이 되었던 Asp-63, Aps-195, 그리고 Glu-245가 모두 효소 활성 및 기질과의 결합에 상당히 중요한 역할을 하고 있음이 판명되었다. 이러한 세 부위의 산성 아미노산들은 inulinase, levan fructotransferase와 invertase에 모두 보전적으로 위치하므로 이들은 β-fructofuranosidase family내에서 공통된 역할을 할 것으로 사료된다.
목차
Introduction
Materials and Methods
Results and Discussion
Acknowledgements
References
초록
참고문헌 (19)
참고문헌 신청
Alberto, F., C. Bignon, G. Sulzenbacher, B. Henrissat, and M. Czjzek. 2004. The three-dimensional structure of invertase (beta-fructosidase) from Thermotoga maritima reveals a bimodular arrangement and an evolutionary relationship between retaining and in
Batista, F. R., L. Hernandez, J. R. Fernandez, J. Arrieta, C. Menendez, R. Gomez, Y. Tanbara, and T. Pons. 1999. Substitution of Asp-309 by Asn in the Arg-Asp-Pro (RDP) motif of Acetobacter diazotrophicus levansucrase affects sucrose hydrolysis, but not e
Cha, J., N. H. Park, S. J. Yang, and T. H. Lee. 2001. Molecular and enzymatic characterization of a levan fructotransferase from Micobacterium sp. AL-210. J. Biotechnol. 91, 49-61.
Davies, G. and B. Henrissat. 1995. Structures and mechanisms of glycosyl hydrolases. Structure 15, 853-859.
Henrissat, B. 1991. A classification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequence similarities. Biochem. J. 280, 309-316.
Batista, F. R., L. Hernandez, J. R. Fernandez, J. Arrieta, C. Menendez, R. Gomez, Y. Tanbara, and T. Pons. 1999. Substitution of Asp-309 by Asn in the Arg-Asp-Pro (RDP) motif of Acetobacter diazotrophicus levansucrase affects sucrose hydrolysis, but not e
Cha, J., N. H. Park, S. J. Yang, and T. H. Lee. 2001. Molecular and enzymatic characterization of a levan fructotransferase from Micobacterium sp. AL-210. J. Biotechnol. 91, 49-61.
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