Nested PCR과 DNA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay를 이용한 Ralstonia solanacearum의 검출

고영진; 조홍범

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자료유형: 학술저널

저자정보: 고영진 (다이아프로브) 조홍범 (서경대학교)

저널정보: 한국미생물학회 미생물학회지 미생물학회지 43권 3호

발행연도: 2007.9

수록면: 179 - 185 (7page)

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본 연구는 polymerase chain reaction (PCR) 기법과 DNA enzyme-linked immunosorbent assay (DNA ELISA) 기법을 이용하여 토양내 식물병원균인 Ralstonia solanacearum를 검출하고자 하였다. 토양 시료로부터 분석에 사용될 R. solanacearum DNA를 추출하기 위하여 몇 가지 방법을 비교 평가한 결과 기존의 DNA 추출 방법에 비하여 Guanidin isothiocyanate와 Chelex-100 resin을 사용하는 방법이 토양 내에 존재하는 다양한 종류의 반응 저해 물질과 R. solanacearum 만의 고유한 PCR 반응 저해물질들을 제거하는데에 효과적이었다. R. solanacearum만을 특이적으로 검출하기 위해 fliC 유전자 부위에 특이적인 몇 종의 primer들을 제작하였다. 이들 중 높은 민감도와 특이도를 나타내는 두 set의 primer RsolfliC (forward; 5-GAACGCCAACGGTGCGAACT-3 and reverse; 5-GGCGG CCTTCAGGGAGGTC-3, designed by J. Schonfeld et al.)와 RS_247 (forward; 5-GGCGGTCTGTCGGCRG-3 and reverse; 5-CGGTCGCGTTGGCAAC-3, designed by this study)를 선정하여 nested PCR을 수행할 수 있도록 고안하였다. Nested PCR primer에 biotin을 표지하였고 nested PCR 산물의 내부 서열과 특이적으로 교잡반응을 할 수 있는 probe를 제작하여 PCR 결과를 DNA-EIA 반응으로 확인 분석할 수 있도록 하였다. Primary PCR과 nested PCR의 산물을 전기영동 상에서 확인한 결과, nested PCR이 약 10² 정도의 높은 민감도를 나타내었고 DNA-EIA의 경우 10²~10³ 정도의 민감도를 상승시켜주는 것으로 확인되었다.

#DNA enzyme immunoassay #Ralstonia solanacearum

참고문헌 (29)

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1. [학술지(정기간행물)] - / 2000 / 채소 병해충 진단과방제

2. [학술지(정기간행물)] - / 1999 / Design of division specific primers of Ralstonia solanacearum and application to the identification of European isolates 105 : 373 ~ 380

3. [학술지(정기간행물)] - / 2001 / The viable but nonculturable state of Ralstonia solanacearum may be involved in long term survival and plant infection 67 : 3866 ~ 3872

4. [학술지(정기간행물)] - / 1996 / Detection of Bordetella pertussis by rapid cycle PCR and colorimetric microwell hybridization 34 : 1355 ~ 1358

5. [학술지(정기간행물)] - / 1995 / Rapid detection of Salmonella subspecies I by PCR combined with non radioactive hybridisation using covalently immobilised oligonucleotide on a microplate 10 ( ) : 245 ~ 252

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고영진

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주요연구분야 자연과학 > 생물학

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조홍범

소속기관 서경대학교

주요연구분야 자연과학 > 생물학 의약학 > 임상의학 > 산부인과학

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