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Subtilisin (EC 3.4.21.14) is the major extracellularalkaline serine protease of Bacillus species. Previously, wefound that subtilisins did not migrate in the electrophoreticfield in the Laemmili buffer system due to their high pI values(over 8.8); however, it formed a “binding mode” at the topof the separating gel [5]. Utilizing this characteristic, foursubtilisins from Bacillus sp. strains (e.g., B. subtilis 168, B.subtilis KCTC 1021, B. amyloliquefaciens KCTC 3002, andBacillus sp. DJ-1 and DJ-4) were easily and quickly identifiedby an over-running electrophoretic technique with a miniscaleculture supernatant (less than 20 ml) without any columnchromatographic steps. Two subtilisins (DJ-1 and a recombinantversion) from Bacillus sp. DJ-1 were characterized, andthe enzymatic properties were determined by SDS-fibrinzymography and densitometric analysis. Based on thisobservation, the recombinant pro-subtilisin DJ-1 showed thesame “binding mode,” similar to native subtilisin DJ-1. Onthe other hand, mature subtilisin DJ-1 without pro-peptideshowed no enzymatic activity.

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