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저자정보
Xin Liu (Shantou University) Ying Dong (Shantou University) Jingquan Wang (Shantou University) Long Li (Shantou University) Zhenmin-Zhong (Shantou University) Yun-Pan Li (Shantou University) Shao-Jun Chen (Shantou University) Yu-Cai Fu (Shantou University Medical College) Wen-Can Xu (Shantou University Medical College) Chi-Ju Wei (Shantou University)
저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제27권 제6호
발행연도
2017.6
수록면
1,098 - 1,105 (8page)
DOI
10.4014/jmb.1611.11082

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Vesicular stomatitis virus G glycoprotein (VSV-G) has been widely used for pseudotyping retroviral, lentiviral, and artificial viral vectors. The objective of this study was to establish a potential approach for large-scale production of VSV-G. To this end, VSV-G was cloned with an N-terminal His-tag into Pichia pastoris expression vector pPIC3.5K. Three clones (Muts) containing the VSV-G expression cassette were identified by PCR. All clones proliferated normally in expansion medium, whereas the proliferation was reduced significantly under induction conditions. VSV-G protein was detected in cell lysates by western blot analysis, and the highest expression level was observed at 96 h post induction. VSV-G could also be obtained from the condition medium of yeast protoplasts. Furthermore, VSV-G could be incorporated into Ad293 cells and was able to induce cell fusion, leading to the transfer of cytoplasmic protein. Finally, VSV-G-mediated DNA transfection was assayed by flow cytometry and luciferase measurement. Incubation of VSV-G lysate with the pGL3-control DNA complex increased the luciferase activity in Ad293 and HeLa cells by about 3-fold. Likewise, incubation of VSV-G lysate with the pCMV-DsRed DNA complex improved the transfection efficiency into Ad293 by 10% and into HeLa cells by about 1-fold. In conclusion, these results demonstrate that VSV-G could be produced from P. pastoris with biofunctionalities, demonstrating that large-scale production of the viral glycoprotein is feasible.
#Vesicular stomatitis virus G glycoprotein #Pichia pastoris #fusion #DNA delivery #large-scale production

목차

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Roche S / 2008 / Structures of vesicular stomatitis virus glycoprotein:membrane fusion revisited / Cell. Mol. Life Sci 65:1716~1728 google schola Eidelman O / 1984 / pHdependent fusion induced by vesicular stomatitis virus glycoprotein reconstituted into phospholipid vesicles / J. Biol. Chem 259:4422~4428 google schola Sun XJ / 2010 / Internalization and fusion mechanism of vesicular stomatitis virus and related rhabdoviruses / Future Virol 5:85~96 google schola Backovic M / 2009 / Class III viral membrane fusion proteins / Curr. Opin. Struct. Biol 19:189~196 google schola Chen ST / 1996 / Generation of packaging cell lines for pseudotyped retroviral vectors of the G protein of vesicular stomatitis virus by using a modified tetracycline inducible system / Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:10057~10062 google schola

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